2015版藥典即將于今年12月實施，新版藥典逐步與接軌，修改或新增了微生物菌種管理、菌種檢定、菌種鑒定、菌株分型、菌株溯源、生產(chǎn)過程微生物監(jiān)測、環(huán)境微生物監(jiān)測等內(nèi)容，對國內(nèi)制藥企業(yè)在微生物監(jiān)控管理方面提出了新的要求和挑戰(zhàn)，針對客戶需求，CICC對此進行了梳理，以方便國內(nèi)制藥企業(yè)在生產(chǎn)過程的微生物控制及新藥申報生產(chǎn)菌種管理方面快速理解和符合新版藥典的要求。

一、生物制品

生物制品生產(chǎn)檢定用菌毒種管理規(guī)程

生物制品生產(chǎn)用菌毒種應(yīng)采用種子批系統(tǒng)。生產(chǎn)用菌毒種應(yīng)按各論要求進行檢定。應(yīng)對生產(chǎn)用菌毒種已知的主要抗原表位的遺傳穩(wěn)定性進行檢測，并證明在規(guī)定的使用代次內(nèi)其遺傳性狀是穩(wěn)定的。菌毒種經(jīng)檢定后，應(yīng)根據(jù)其特性，選用凍干或適當?shù)姆椒皶r保存。保存的菌毒種傳代或凍干均應(yīng)填寫記錄。

生物制品各論中涉及的微生物檢定

培養(yǎng)物純度、培養(yǎng)特征、染色鏡檢、電鏡檢查、生化反應(yīng)、血清學特性、對抗生素的抗性、毒力試驗、免疫力試驗、免疫原性試驗、抗原性試驗、目的基因核苷酸序列測定、質(zhì)粒DNA檢測、質(zhì)?？截悢?shù)、DNA殘留、蛋白質(zhì)殘留等。

二、微生態(tài)活菌制品

微生態(tài)活菌制品總論

生產(chǎn)用菌種應(yīng)按照“生物制品生產(chǎn)檢定用菌毒種管理規(guī)程"的有關(guān)規(guī)定建立種子批系統(tǒng)。

菌種的屬、種型分類鑒定，應(yīng)依據(jù)版伯杰氏細菌系統(tǒng)鑒定手冊（Bergey’s Manual of Systematic Bacteriology）和伯杰氏細菌命名手冊(Bergey’s Manual of Determinative Bacteriology）的有關(guān)規(guī)定，包括形態(tài)、生長代謝特性檢查，原始種子或主種子還應(yīng)作遺傳特性和抗生素敏感性等檢查。

三級種子批常規(guī)檢查包括培養(yǎng)特性及染色鏡檢、生化反應(yīng)、毒性試驗， 除另有規(guī)定外，原始種子或主種子批還需進行以下檢查：細菌代謝產(chǎn)物-脂肪酸測定、遺傳特性分析、抗生素敏感性試驗、穩(wěn)定性試驗。

三、微生物鑒定指導(dǎo)原則（通則9204）

微生物鑒定是藥品微生物檢驗中的重要環(huán)節(jié)，藥典附錄相應(yīng)章節(jié)中對檢出微生物的鑒定做了明確規(guī)定，如“非無菌產(chǎn)品的微生物檢查：控制菌檢查"（通則1106）中選擇培養(yǎng)基或指示培養(yǎng)基上發(fā)現(xiàn)的疑似菌落需進行鑒定；對“無菌檢查法"（通則1101）的陽性實驗結(jié)果中分離的微生物進行鑒定，以判定試驗是否重試；藥品潔凈實驗室微生物監(jiān)測和控制指導(dǎo)原則（通則9203）中建議對潔凈室和其他受控環(huán)境分離到的微生物進行鑒定，以掌握環(huán)境微生物污染情況，有助于污染調(diào)查。此外，在藥品生產(chǎn)中，有時亦需對藥物原料、輔料、制藥用水、生產(chǎn)環(huán)境、中間產(chǎn)物和終產(chǎn)品中檢出的微生物進行適當水平的鑒定。

微生物鑒定內(nèi)容包括待檢菌的分離純化、氧化酶試驗、過氧化氫酶試驗、凝固酶試驗、培養(yǎng)特征、細胞特征、生理學特征、生化反應(yīng)、抗生素敏感性、血清學特征、脂肪酸、微生物毒素、全細胞組分、DNA-DNA雜交、GC摩爾百分含量、PCR反應(yīng)、16S rRNA序列、18S rRNA序列、MLST、DNA探針、核糖體分型、限制性酶切片段圖譜等。

菌株水平的鑒定在污染調(diào)查過程中非常有用，當產(chǎn)品中的微生物數(shù)量高于建議水平或出現(xiàn)異常高的微生物檢出率時尤其適用。菌株水平的鑒定在無菌工藝中也很重要，在無菌試驗結(jié)果陽性和培養(yǎng)基灌裝等模擬工藝失敗時，必須對檢出的微生物進行評估。菌株水平鑒定技術(shù)方法包括限制性核酸內(nèi)切酶酶解、Southern雜交、PFGE、全基因組測序、血清型等。