2012 04-18

PCR反應(yīng)中Taq酶的選擇

隨著分子生物學(xué)研究發(fā)展的不斷廣泛和深入，PCR已成為一門(mén)相當(dāng)成熟的常規(guī)技術(shù)，而熱聚合酶（即Taq酶）的合理選擇是PCR成敗與否的一個(gè)關(guān)鍵因素。目前市面上有多種Taq酶，能夠滿(mǎn)足多方面的實(shí)驗(yàn)需要。那么，...

2012 04-13

Feulgen反應(yīng)實(shí)驗(yàn)步驟

標(biāo)本需經(jīng)固定后方可染色，Carnoy固定液可按無(wú)水乙醇：三氯甲烷：冰醋酸為6：3：1比例配制。固定后石蠟切片即可。盡量不用新鮮組織恒冷箱切片，因胞質(zhì)中存在的縮醛磷脂會(huì)出現(xiàn)非特異染色。若必須使用恒冷箱切...

2012 03-26

轉(zhuǎn)化子DNA的快速鑒定法

快速細(xì)胞破碎法實(shí)驗(yàn)步驟1、挑取轉(zhuǎn)化平板上的單菌接種于含相應(yīng)抗生素的2mlLB中，37℃振蕩培養(yǎng)至A590值為0.6～0.8。2、取1ml菌液至1.5mlEppendorf管中，9000rpm離心9mi...

2012 03-19

細(xì)胞總RNA的提取操作

1.六孔板每孔細(xì)胞中加入1mlTrizol，冰上放置5min，槍頭吹打。2.將各孔裂解液吸到1.5mlEP管中，加入氯仿0.2ml/管，用力振搖15s。15－30℃下孵育2-3min，離心（4℃，12...

2012 03-06

熒光染料-CFSE活細(xì)胞標(biāo)記

熒光染料CFSE（CFDA-SE），是一種可對(duì)活細(xì)胞進(jìn)行熒光標(biāo)記的新型染料，可以標(biāo)記活體細(xì)胞。其基本原理如下：CFSE能夠輕易穿透細(xì)胞膜，在活細(xì)胞內(nèi)與胞內(nèi)蛋白共價(jià)結(jié)合，水解后釋放出綠色熒光。在細(xì)胞分裂...

2012 02-27

第三代測(cè)序技術(shù)

如果有人告訴你用顯微鏡實(shí)時(shí)觀測(cè)單分子DNA聚合酶復(fù)制DNA，并用它來(lái)測(cè)序，你一定會(huì)認(rèn)為他異想天開(kāi)，沒(méi)有一點(diǎn)生物的sense。我zui初就是這樣認(rèn)為的，然而它不僅可以實(shí)現(xiàn)，而且已經(jīng)實(shí)現(xiàn)了！這個(gè)就是被稱(chēng)為...

2012 02-20

大腸菌群顯色培養(yǎng)基

大腸菌群顯色培養(yǎng)基ColiformChromogenicMedium用途：用于快速、準(zhǔn)確檢測(cè)大腸菌群，培養(yǎng)24小時(shí)，大腸菌群顯藍(lán)綠色腸菌群顯色培養(yǎng)基是青島海博生物公司改良的培養(yǎng)基，用于食品、水、牛奶、...

2012 02-17

磷酸鹽緩沖液(PB)的配制

1.A液(0.2M*水溶液)：NaH2PO4?H2O27.6g，溶于蒸餾水中，稀釋至1000ml。2.B液(0.2M*水溶液)：Na2HPO4?7H2O53.6g(或Na2HPO4?12H2O71.6...

2012 02-17

提高RT-PCR的靈敏度與產(chǎn)物長(zhǎng)度

材料和方法1.EppendorfcMasterRTplusPCR系統(tǒng)2.EppendorfPerfectRNAEukaryotic試劑盒3.所有的PCR反應(yīng)均在EppendorfMastercycle...

2012 02-10

正常小鼠腎間質(zhì)成纖維細(xì)胞的培養(yǎng)技術(shù)

實(shí)驗(yàn)材料：1.腎組織：取自8周齡健康雌性小鼠；2.不含Ca2+和Mg2+的1×PBS，添加200000IU/L*、200mg/L*，pH7.2；3.0.1%明膠：為生長(zhǎng)基質(zhì)成分，在取材前先用它包被培養(yǎng)...

2012 02-02

PCR實(shí)驗(yàn)技術(shù)指南之污染與對(duì)策

PCR反應(yīng)的zui大特點(diǎn)是具有較大擴(kuò)增能力與*的靈敏性，但令人頭痛的問(wèn)題是易污染，極其微量的污染即可造成假陽(yáng)性的產(chǎn)生。1、污染原因(1)標(biāo)本間交叉污染：標(biāo)本污染主要有收集標(biāo)本的容器被污染，或標(biāo)本放置時(shí)...

2012 01-31

實(shí)驗(yàn)儀器器皿中英文對(duì)照

很全面的實(shí)驗(yàn)儀器器皿中英文對(duì)照，可以使用Ctrl+F鍵來(lái)查找，或復(fù)制到Word中查找使用。adapter接液管aircondenser空氣冷凝管beaker燒杯boilingflask燒瓶boilin...

2011 12-23

基因文庫(kù)的構(gòu)建

一個(gè)基因文庫(kù)中應(yīng)包含的克隆數(shù)目與該生物的基因組的大小和被克隆DNA片段的長(zhǎng)度有關(guān)。原核生物的基因組較小，需要的克隆數(shù)也較少；真核生物的基因組較大，克隆數(shù)需相應(yīng)增加，才能包含所有的基因。此外，每一載體D...

2011 12-06

DNA電泳常見(jiàn)問(wèn)題分析

1請(qǐng)問(wèn)配制聚丙烯酰胺凝膠電泳膠時(shí)，促凝的是TEMED還是過(guò)硫酸銨？膠聚時(shí)間很長(zhǎng)如何解決？過(guò)硫酸銨提供驅(qū)動(dòng)丙烯酰胺和雙丙烯酰胺聚合所需的自由基，而TEMED通過(guò)催化過(guò)硫酸銨形成自由基而加速它倆的聚合。膠...

2011 11-09

RNA提取

1、RNA降解A、新鮮細(xì)胞：如果試劑沒(méi)有問(wèn)題，且外源性污染也可以排除，那么降解幾乎都來(lái)自裂解液的用量不足。如果將裂解液直接加入培養(yǎng)皿中裂解細(xì)胞，一定要使裂解液能覆蓋住細(xì)胞。B、新鮮組織：某些富含內(nèi)源核...

2011 11-02

*梯度溶液分離動(dòng)物細(xì)胞核

試劑和器材：1.OptiPrepTM（600g*，ρ=1.32g/ml）；2.OptiPrepTM稀釋劑（OptiPrepTMdiluent，OD）：150mmol/LKCl、30mmol/LMgCl...

2011 10-24

抗體實(shí)驗(yàn)中各種樣品選擇的條件

一、如何選擇合適的一抗請(qǐng)先確定您要檢測(cè)的種屬和使用的實(shí)驗(yàn)方法，然后查找相關(guān)產(chǎn)品，根據(jù)說(shuō)明書(shū)上描述的“適用種屬和實(shí)驗(yàn)方法”來(lái)確定合適的抗體。如果說(shuō)明書(shū)中有明確您要檢測(cè)的種屬和實(shí)驗(yàn)方法均經(jīng)過(guò)檢測(cè)，則您可以...

2011 10-11

MTT實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前準(zhǔn)備

1.選擇適當(dāng)?shù)募?xì)胞接種濃度。一般情況下，96孔培養(yǎng)板的一內(nèi)貼壁細(xì)胞長(zhǎng)滿(mǎn)時(shí)約有105個(gè)細(xì)胞。但由于不同細(xì)胞貼壁后面積差異很大，因此，在進(jìn)行MTT試驗(yàn)前，要進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)其貼壁率、倍增時(shí)間以及不同接種細(xì)胞...

2011 09-19

免疫組化實(shí)驗(yàn)方法

一、免疫組化（Immunohistochemistry,IHC/Immunocytochemistry,ICC）原理免疫組化是應(yīng)用免疫學(xué)基本原理--抗原抗體反應(yīng)，即抗原與抗體特異性結(jié)合的原理，通過(guò)化學(xué)...

2011 09-14

DNA片段純化常會(huì)遇到的問(wèn)題

1、DNA回收率低A、溶膠液用量過(guò)少準(zhǔn)確計(jì)算凝膠的重量，按比例加入溶膠液。B、凝膠塊未*融化加入溶膠液后，置于55℃~60℃進(jìn)行水浴，如有必要加入更多量的溶膠液。C、電泳緩沖液使用時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，不新鮮換用...