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抗 原 修 復(免疫組化石蠟切片)
用于福爾馬林固定的石蠟包埋組織芯片需要抗原修復:
福爾馬林固定的組織有可能破壞了原來組織的抗原結(jié)構(gòu),蛋白多肽發(fā)生交聯(lián),導致部分抗原表位封閉,結(jié)合位點減少,所以需要抗原修復,以暴露原來的抗原表位,達到充分顯露抗原,以不出現(xiàn)明顯脫片現(xiàn)象為佳。
抗原修復的幾種常用方法:(供參考)
1. 微波爐加熱:在微波爐里加熱0.01*緩沖液(pH6.0)至沸騰后將組織芯片放入,斷電,間隔5-10分鐘,反復1-2次。
適用的抗原:來源于人、大鼠、小鼠的組織標本;來源于其他動物種屬的組織標本:
Bcl-2.Bax.AR.PR.C-fos.x-jum.z-kit.c-myc.E-cadherin.
ChromograninA.Cyclin.ER.Heatshock.Protein.HPV.Ki-67.MDMZ.P53.P34.P15.P-glycoprotein.PKC.PCNA.ras.Rb.等
2. 高壓熱修復:在沸水中加入EDTA(pH8.0)或0.01m*緩沖溶液(pH6.0).蓋上不銹鋼鍋蓋,但不能鎖定。將玻片置于金屬染色架上,緩慢加壓,使玻片在緩沖液中浸泡五分鐘,然后將蓋子鎖定,小閥門將會升起來。10分鐘后除去熱源,置入涼水中,當小閥門沉下去后打開蓋子。此方法適用于較難檢測或核抗原的抗原修復。(骨及軟骨組織的標本選擇較溫和的微波加熱修復)
3. 沸熱修復: 電爐或水浴鍋加熱0.01M*緩沖液(pH6.0)至95℃左右,放入組織芯片加熱10-15分鐘。
4. 酶消化方法:
常用0.1%*和0.4%*液。*使用前預熱37℃,消化時間約為5-30分鐘。適用于被固定遮蔽的抗原:包括 Collagen.GFAP. Complement.Cytokeratin.c-erB-2.LCA.LN.等
上海瑞齊生物技術(shù)有限公司 免疫學實驗室
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