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上海瑞齊生物科技有限公司

上海瑞齊-Elisa試劑盒

時(shí)間:2010-9-18閱讀:694
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人巨噬細(xì)胞炎癥蛋白2MIP-2)酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書

本試劑盒僅供研究使用。
檢測(cè)范圍:                                                          96T
15pg/ml-400pg/ml
 
使用目的:
本試劑盒用于測(cè)定人血清、血漿及相關(guān)液體樣本中巨噬細(xì)胞炎癥蛋白2MIP-2含量。
實(shí)驗(yàn)原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中巨噬細(xì)胞炎癥蛋白2MIP-2水平。用純化的巨噬細(xì)胞炎癥蛋白2MIP-2抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入巨噬細(xì)胞炎癥蛋白2MIP-2),再與HRP標(biāo)記的巨噬細(xì)胞炎癥蛋白2MIP-2抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的巨噬細(xì)胞炎癥蛋白2MIP-2呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值),通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中巨噬細(xì)胞炎癥蛋白2MIP-2濃度
標(biāo)本要求
1.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2.不能檢測(cè)含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
操作步驟
1.         標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。

 

1.         待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl,待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測(cè)樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。
2.         溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。  
3.         配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
4.         洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。
5.         加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。
6.         溫育:操作同3。
7.         洗滌:操作同5。
8.         顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
9.         終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。
10.     測(cè)定:以空白空調(diào)零,450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD值)。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

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