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ELISA方法被廣泛應(yīng)用于各種抗原和抗體測定。但ELISA測定中影響因素較多，而且其操作中有一定的技術(shù)要求，在檢測過程中除正常反應(yīng)外，有時(shí)常見到一些錯(cuò)誤的結(jié)果。引起ELISA測定錯(cuò)誤結(jié)果的原因主要有：①標(biāo)本因素；②試劑因素；③操作因素。下面就一些常見ELISA操作過程中的問題一一分析。1．樣品稀釋酶聯(lián)免疫反應(yīng)是一種敏感性很高的反應(yīng)，如果血清不稀釋，不可避免會(huì)產(chǎn)生很強(qiáng)的非特異性反應(yīng)，出現(xiàn)假陽性。因此，國外檢測血清抗體的試劑盒，均規(guī)定將血清稀釋至適當(dāng)?shù)谋稊?shù)，以降低非特異性反應(yīng)，使特異性的抗原抗體反應(yīng)
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酶標(biāo)記物包括酶標(biāo)記抗原、酶標(biāo)記抗體和酶標(biāo)記SPA等。酶標(biāo)記物質(zhì)量的好壞直接關(guān)系到免疫酶技術(shù)的成功與否，因此被稱為關(guān)鍵的試劑。酶標(biāo)記物中zui常用的是酶標(biāo)記抗體，它是將酶與特異性抗體經(jīng)適當(dāng)方法連接而成。酶標(biāo)記抗體的質(zhì)量主要取決于純度好、活性強(qiáng)及親和力高的酶和抗體，其次要有良好的制備方法。目前，高質(zhì)量的酶（如辣根過氧化物酶，簡稱HRP）國內(nèi)已有商品供應(yīng)。高質(zhì)量的抗體則可通過提取純化而獲得。在制備方法上，宜選用產(chǎn)率高、不影響結(jié)合物的活性和不混雜干擾性物質(zhì)且操作簡便易行的方法。一、工作濃度的選擇在免疫酶
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1.1基本概念1.1.1質(zhì)量控制（QuailityControl,Q.C）質(zhì)量控制是監(jiān)視全過程，排除誤差，防止變化，維持標(biāo)準(zhǔn)化現(xiàn)狀的一個(gè)管理過程。這一過程是通過一個(gè)反饋環(huán)路進(jìn)行的。1）確定控制的對象；2）規(guī)定控制對象的標(biāo)準(zhǔn)（預(yù)期值）；3）制定或選擇控制方法和手段；3）測量實(shí)際數(shù)據(jù)；4）比較或較對實(shí)際數(shù)據(jù)與預(yù)期值之間的差異，并說明產(chǎn)生這一差異的原因。超出預(yù)定誤差范圍，報(bào)警系發(fā)出信號(hào)，反饋通道中斷。5）采取行動(dòng)，解決差異?；謴?fù)原狀（原標(biāo)準(zhǔn)狀態(tài)）的手段發(fā)揮作用。質(zhì)量控制主要采用質(zhì)控圖進(jìn)行。質(zhì)控圖是把某
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小鼠二?；视停―AG/DG）ELISA試劑盒說明書預(yù)期應(yīng)用ELISA法定量測定小鼠血清、血漿、組織勻漿或其它相關(guān)生物液體中DAG含量。實(shí)驗(yàn)原理用純化的DAG抗體包被微孔板，制成固相載體，往微孔中依次加入標(biāo)本或標(biāo)準(zhǔn)品、生物素化的DAG抗體、HRP標(biāo)記的親和素，經(jīng)過*洗滌后用底物（TMB）顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的DAG呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（值），計(jì)算樣品濃度。試劑盒組成及試劑配制1、酶標(biāo)板：一塊（
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SYSTEMS®中文說明書UNIONHONEST酶聯(lián)免疫吸附測試EnzymelinkedlmmunosorbentAssay_____________________________________________________________________________________雞（Chicken）干擾素-y（IFN-y）ELISA檢測試劑盒本試劑僅供研究使用試驗(yàn)原理：IFN-Y試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）.已知IFN-Y濃度的標(biāo)準(zhǔn)品、未知濃度的樣品加入微孔酶標(biāo)
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SYSTEMS®中文說明書UNIONHONEST酶聯(lián)免疫吸附測試EnzymelinkedlmmunosorbentAssay_____________________________________________________________________________________人（Human）脫氧吡啶酚（DPD）ELISA檢測試劑盒本試劑僅供研究使用標(biāo)本：血清或血漿試驗(yàn)原理：DPD試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）.已知DPD濃度的標(biāo)準(zhǔn)品、未知濃度的樣品加入微孔酶標(biāo)
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SYSTEMS®中文說明書UNIONHONEST酶聯(lián)免疫吸附測試EnzymelinkedlmmunosorbentAssay_____________________________________________________________________________________兔（Rabbit）神經(jīng)肽Y（NPY）ELISA檢測試劑盒本試劑僅供研究使用試驗(yàn)原理：NPY試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）.已知NPY濃度的標(biāo)準(zhǔn)品、未知濃度的樣品加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)進(jìn)行檢測。先
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核酸疫苗是將編碼某種抗原蛋白的外源基因（DNA或RNA）直接導(dǎo)入動(dòng)物體細(xì)胞內(nèi),并通過宿主細(xì)胞的表達(dá)系統(tǒng)合成抗原蛋白,誘導(dǎo)宿主產(chǎn)生對該抗原蛋白的免疫應(yīng)答,以達(dá)到預(yù)防和治療疾病的目的。核酸疫苗的本質(zhì)是含有病原體抗原基因的真核表達(dá)載體，當(dāng)它被導(dǎo)入動(dòng)物機(jī)體后，可被動(dòng)物細(xì)胞所攝取并表達(dá)病原體的抗原蛋白，從而誘導(dǎo)機(jī)體對該蛋白的免疫反應(yīng)。關(guān)于核酸疫苗誘導(dǎo)免疫反應(yīng)的機(jī)理目前了解的還不十分清楚。一般認(rèn)為核酸疫苗通過肌肉注射或基因槍（一種將DNA吸附于細(xì)微的金顆粒表面通過高壓氣流將DNA導(dǎo)人機(jī)體皮下的方式）導(dǎo)入機(jī)體
