1.DMSO之等級和無菌過濾之方式為何？

冷凍保存使用的DMSO等級，必須為Tissueculturegrade的DMSO(如SigmaD2650)，其本身即為無菌狀況，*次開瓶后應(yīng)立即少量分裝于無菌試管中，保存于4°C，避免反復(fù)冷凍解凍造成DMSO之裂解而釋出有害物質(zhì)，并可減少污染之機(jī)會。若要過濾DMSO，則須使用耐DMSO之Nylon材質(zhì)濾膜。

2.冷凍保存細(xì)胞之方法？

冷凍保存方法一:冷凍管置于4°C30-0分鐘→(-20°C30分鐘*)→-80°C16~18小時(shí)(或隔夜)→液氮槽vaporphase*儲存。冷凍保存方法二:冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3°C至–80 °C以下，再放入液氮槽vaporphase*儲存。*-20°C不可超過1小時(shí)，以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80°C冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

3.細(xì)胞欲冷凍保存時(shí)，細(xì)胞冷凍管內(nèi)應(yīng)有多少細(xì)胞濃度？

冷凍管內(nèi)細(xì)胞數(shù)目一般為1x10⁶cells/mlvial，融合瘤細(xì)胞則以5x10⁶cells/mlvial為宜。

4. 應(yīng)如何避免細(xì)胞污染？

細(xì)胞污染的種類可分成細(xì)菌、酵母菌、霉菌、病毒和霉?jié){菌。主要的污染原因?yàn)闊o菌操作技術(shù)不當(dāng)、操作室環(huán)境不佳、污染之血清和污染之細(xì)胞等。嚴(yán)格之無菌操作技術(shù)、清潔的環(huán)境、與品質(zhì)良好之細(xì)胞來源和培養(yǎng)基配制是減低污染之方法。

5.如果細(xì)胞發(fā)生微生物污染時(shí)，應(yīng)如何處理？

直接滅菌后丟棄之。

6.支原體(mycoplasma)污染的細(xì)胞，是否能以肉眼觀察出異狀？

不能。

除極有經(jīng)驗(yàn)之專家外，大多數(shù)遭受支原體污染的細(xì)胞株，無法以其外觀分辨之。

7.支原體污染會對細(xì)胞培養(yǎng)有何影響？

支原體污染幾乎可影響所有細(xì)胞之生長參數(shù)，代謝及研究之任一數(shù)據(jù)。故進(jìn)行實(shí)驗(yàn)前，必須確認(rèn)細(xì)胞為mycoplasma-free，實(shí)驗(yàn)結(jié)果之?dāng)?shù)據(jù)方有意義。

8.偵測出細(xì)胞株有支原體污染時(shí)，該如何處理？

直接滅菌后丟棄，以避免污染其它細(xì)胞株。

9.CO2培養(yǎng)箱之水盤如何保持清潔？

定期(至少每兩周一次)以無菌蒸餾水或無菌去離子水更換之。

10.為何培養(yǎng)基保存于4°C冰箱中，顏色會偏暗紅色，且pH值會越來越偏堿性？

培養(yǎng)基保存于4°C冰箱中，培養(yǎng)基內(nèi)之CO2會逐漸溢出，造成培養(yǎng)基越來越偏堿性。而培養(yǎng)基中之酸堿指示劑(通常為phenolred)的顏色也會隨堿性增加而更偏暗紅。培養(yǎng)基偏堿之結(jié)果，將造成細(xì)胞生長停滯或死亡。若培養(yǎng)基偏堿時(shí)，可以通入無菌過濾之CO2，以調(diào)整pH值?；蚣尤?調(diào)整PH值。

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上海子實(shí)生物科技有限公司是一家專注于生物醫(yī)藥的科研產(chǎn)品研究、開發(fā)、生產(chǎn)和銷售的高科技企業(yè)。公司自成立以來便一直秉承“精品、專業(yè)、誠信、便捷”的宗旨和理念，不斷的開拓進(jìn)取，務(wù)實(shí)創(chuàng)新，收錄與典藏了近千種各類細(xì)胞株/系，其中自主研發(fā)建系各類示蹤細(xì)胞、耐藥株細(xì)胞、基因敲除細(xì)胞等百余種，客戶遍及全國各地的醫(yī)院、高校、藥廠、科研機(jī)構(gòu)等，產(chǎn)品質(zhì)量與/服務(wù)體系深受廣大客戶信任和青瞇。目前公司以細(xì)胞生物學(xué)產(chǎn)品為主體，陸續(xù)建立與開發(fā)了：細(xì)胞STR檢測試劑盒、PDX人源腫瘤細(xì)胞異體移植技術(shù)、荷瘤動(dòng)物/特殊疾病動(dòng)物模型等新產(chǎn)品和技術(shù)體系，為廣大客戶提供更多更好的科研產(chǎn)品和服務(wù)。子實(shí)期待與您的合作……長按圖片掃描二維碼，取得關(guān)注。按公眾號歷史信息有更多精彩內(nèi)容。

1.DMSO之等級和無菌過濾之方式為何？

冷凍保存使用的DMSO等級，必須為Tissueculturegrade的DMSO(如SigmaD2650)，其本身即為無菌狀況，*次開瓶后應(yīng)立即少量分裝于無菌試管中，保存于4°C，避免反復(fù)冷凍解凍造成DMSO之裂解而釋出有害物質(zhì)，并可減少污染之機(jī)會。若要過濾DMSO，則須使用耐DMSO之Nylon材質(zhì)濾膜。

2.冷凍保存細(xì)胞之方法？

冷凍保存方法一:冷凍管置于4°C30-0分鐘→(-20°C30分鐘*)→-80°C16~18小時(shí)(或隔夜)→液氮槽vaporphase*儲存。冷凍保存方法二:冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3°C至–80 °C以下，再放入液氮槽vaporphase*儲存。*-20°C不可超過1小時(shí)，以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80°C冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

3.細(xì)胞欲冷凍保存時(shí)，細(xì)胞冷凍管內(nèi)應(yīng)有多少細(xì)胞濃度？

冷凍管內(nèi)細(xì)胞數(shù)目一般為1x10⁶cells/mlvial，融合瘤細(xì)胞則以5x10⁶cells/mlvial為宜。

4. 應(yīng)如何避免細(xì)胞污染？

細(xì)胞污染的種類可分成細(xì)菌、酵母菌、霉菌、病毒和霉?jié){菌。主要的污染原因?yàn)闊o菌操作技術(shù)不當(dāng)、操作室環(huán)境不佳、污染之血清和污染之細(xì)胞等。嚴(yán)格之無菌操作技術(shù)、清潔的環(huán)境、與品質(zhì)良好之細(xì)胞來源和培養(yǎng)基配制是減低污染之方法。

5.如果細(xì)胞發(fā)生微生物污染時(shí)，應(yīng)如何處理？

直接滅菌后丟棄之。

6.支原體(mycoplasma)污染的細(xì)胞，是否能以肉眼觀察出異狀？

不能。

除極有經(jīng)驗(yàn)之專家外，大多數(shù)遭受支原體污染的細(xì)胞株，無法以其外觀分辨之。

7.支原體污染會對細(xì)胞培養(yǎng)有何影響？

支原體污染幾乎可影響所有細(xì)胞之生長參數(shù)，代謝及研究之任一數(shù)據(jù)。故進(jìn)行實(shí)驗(yàn)前，必須確認(rèn)細(xì)胞為mycoplasma-free，實(shí)驗(yàn)結(jié)果之?dāng)?shù)據(jù)方有意義。

8.偵測出細(xì)胞株有支原體污染時(shí)，該如何處理？

直接滅菌后丟棄，以避免污染其它細(xì)胞株。

9.CO2培養(yǎng)箱之水盤如何保持清潔？

定期(至少每兩周一次)以無菌蒸餾水或無菌去離子水更換之。

10.為何培養(yǎng)基保存于4°C冰箱中，顏色會偏暗紅色，且pH值會越來越偏堿性？

培養(yǎng)基保存于4°C冰箱中，培養(yǎng)基內(nèi)之CO2會逐漸溢出，造成培養(yǎng)基越來越偏堿性。而培養(yǎng)基中之酸堿指示劑(通常為phenolred)的顏色也會隨堿性增加而更偏暗紅。培養(yǎng)基偏堿之結(jié)果，將造成細(xì)胞生長停滯或死亡。若培養(yǎng)基偏堿時(shí)，可以通入無菌過濾之CO2，以調(diào)整pH值。或加入*調(diào)整PH值。

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上海子實(shí)生物科技有限公司是一家專注于生物醫(yī)藥的科研產(chǎn)品研究、開發(fā)、生產(chǎn)和銷售的高科技企業(yè)。公司自成立以來便一直秉承“精品、專業(yè)、誠信、便捷”的宗旨和理念，不斷的開拓進(jìn)取，務(wù)實(shí)創(chuàng)新，收錄與典藏了近千種各類細(xì)胞株/系，其中自主研發(fā)建系各類示蹤細(xì)胞、耐藥株細(xì)胞、基因敲除細(xì)胞等百余種，客戶遍及全國各地的醫(yī)院、高校、藥廠、科研機(jī)構(gòu)等，產(chǎn)品質(zhì)量與/服務(wù)體系深受廣大客戶信任和青瞇。目前公司以細(xì)胞生物學(xué)產(chǎn)品為主體，陸續(xù)建立與開發(fā)了：細(xì)胞STR檢測試劑盒、PDX人源腫瘤細(xì)胞異體移植技術(shù)、荷瘤動(dòng)物/特殊疾病動(dòng)物模型等新產(chǎn)品和技術(shù)體系，為廣大客戶提供更多更好的科研產(chǎn)品和服務(wù)。子實(shí)期待與您的合作……長按圖片掃描二維碼，取得關(guān)注。按公眾號歷史信息有更多精彩內(nèi)容。