1.如何選用培養(yǎng)基？
培養(yǎng)某一類型細胞沒有固定的培養(yǎng)條件。在MEM中培養(yǎng)的細胞，很可能在DMEM或M199中同樣很容易生長。總之，MEM做貼壁細胞培養(yǎng)、RPMI-1640做懸浮細胞培養(yǎng)。
2.為什么要熱滅活血清？
加熱可以滅活補體系統(tǒng)。激活的補體參與溶解細胞事件，刺激平滑肌收縮，細胞和血小板釋放組胺，激活淋巴細胞和巨噬細胞。在進行免疫學(xué)研究、培養(yǎng)ES細胞、昆蟲細胞和平滑肌細胞時，*使用熱滅活血清。
3.L－*在細胞培養(yǎng)中重要嗎？它在溶液中不穩(wěn)定嗎？
L－*在細胞培養(yǎng)時是重要的。脫掉氨基后，L－*可作為培養(yǎng)細胞的能量來源、參與蛋白質(zhì)的合成和核酸代謝。L－*在溶液中經(jīng)過一段時間后會降解，但是確切的降解率一直沒有zui終確定。L－*的降解導(dǎo)致氨的形成，而氨對于一些細胞具有毒性。
4.為什么培養(yǎng)基中可以省去酚紅？
酚紅在培養(yǎng)基中被用來作為PH值的指示劑：中性時為紅色，酸性時為黃色，堿性時為紫色。研究表明，酚紅可以模擬固醇類激素的作用（特別是雌激素）。為避免固醇類反應(yīng)，培養(yǎng)細胞，尤其是哺乳類細胞時，用不加酚紅的培養(yǎng)基。由于酚紅干擾檢測，一些研究人員在做流式細胞檢測時，不使用加有酚紅的培養(yǎng)基。
5.如何用臺盼蘭計數(shù)活細胞？
用無血清培養(yǎng)基把細胞懸液稀釋到200－2000個/毫升，在0.1毫升的細胞中加入0.1毫升的0.4％的臺盼蘭溶液。輕輕混勻，數(shù)分鐘后，用血球計數(shù)板計數(shù)細胞?；罴毎懦馀_盼蘭，因而染成藍色的細胞是死細胞。
6.如何消除組織培養(yǎng)的污染？
當重要的培養(yǎng)污染時，研究者可能試圖消除或控制污染。首先，確定污染物是細菌、真菌、支原體或酵母，把污染細胞與其它細胞系隔離開，用實驗室消毒劑消毒超凈臺，檢查HEPA過濾器。
高濃度的抗生素和抗霉菌素可能對一些細胞系有毒性，因而，做劑量反應(yīng)實驗確定抗生素和抗霉菌素產(chǎn)生毒性的劑量水平。這點在使用抗生素如兩性霉素B和抗霉菌素如泰樂菌素時尤其重要。下面是*的確定毒性水平和消除培養(yǎng)污染的實驗步驟。
1)在無抗生素的培養(yǎng)基中消化、計數(shù)和稀釋細胞，稀釋到常規(guī)細胞傳代的濃度。
2)分散細胞懸液到多孔培養(yǎng)板中，或幾個小培養(yǎng)瓶中。在一個濃度梯度范圍內(nèi)，把選擇抗生素加入到每一個孔中。例如，兩性霉素B*下列濃度，0.25，0.50，1.0，2.0，4.0,8.0 mg/ml。
3)每天觀測細胞毒性指標，如脫落，出現(xiàn)空泡，匯合度下降和變圓。
4)確定抗生素毒性水平后，使用低于毒性濃度2－3倍濃度的抗生素的培養(yǎng)液培養(yǎng)細胞2~3代。
5)在無抗生素的培養(yǎng)基中培養(yǎng)細胞一代。
6)重復(fù)步驟4。
7)在無抗生素的培養(yǎng)基中培養(yǎng)4~6代，確定污染是否以已被消除。
7.培養(yǎng)基中丙酮酸鈉的作用是什么？
丙酮酸鈉可以作為細胞培養(yǎng)中的替代碳源。盡管細胞更傾向于以葡萄糖作為碳源，但是，如果沒有葡萄糖的話，細胞也可以代謝丙酮酸鈉。
8.Hank’s *（HBS）要在空氣中使用，不需要CO2培養(yǎng)箱。原因是什么？Hank’s *（HBS）和Earle’s*（EBS）有什么本質(zhì)的功能差別？
HBS和 EBS 的主要差別在于*的水平，*的含量在Eagles (2.2g/L)中比在Hanks (0.35g/L) 中高。*需用高水平的CO2平衡，以維持溶液的PH值。Eagles液在空氣水平的CO2 中，溶液會變堿，Hanks液在CO2培養(yǎng)箱中會變酸。如果希望在CO2培養(yǎng)箱中保存組織，需要用Eagles液。如果僅僅是清洗將要在細胞培養(yǎng)基中儲存的組織，用Hanks液就可以了。
9.二價離子抑制*活性嗎？使用*時加入EDTA的目的是什么？
二價離子的確抑制*活性。EDTA用來螯合游離的鎂離子和鈣離子，以便保持抑制*的活性。建議*處理細胞前，用EDTA清洗細胞，以消除來自培養(yǎng)基中所有的二價離子。