細胞簡介：

增生性瘢痕由少量有組織的膠原纖維組成，缺乏粘液樣基質(zhì)。增生性瘢痕是深層真皮損傷的結(jié)果，尤其是創(chuàng)傷后形成的傷口和炎癥、纖維化階段延長的傷口。瘢痕大小于損傷范圍，而不累計周圍未受傷皮膚，能自行退化。

細胞特性：

1） 細胞來源于手術(shù)切除的增生性瘢痕組織。

2) 細胞鑒定：纖維連接蛋白（Fibronectin）或波形蛋白（Vimentin）熒光染色為陽性。

3) 經(jīng)鑒定細胞純度高于90%。

4) 不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和。

5) 細胞生長方式：成纖維樣細胞，貼壁培養(yǎng)。

推薦培養(yǎng)基：

我們推薦使用 Delf原代 成纖維 細胞培養(yǎng)體系 作為體外培養(yǎng)的培養(yǎng)基。

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大?。?/span>

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

注意事項：

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關(guān)信息，如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子等，確保細胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細胞出現(xiàn)問題，責(zé)任由客戶自行承擔。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。觀察好細胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細胞后前3天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運輸?shù)脑?，個別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細胞僅供科研使用。

8. 備注：運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。收到細胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿。

公司正在出售的產(chǎn)品：

豚鼠超氧化物歧化酶(SOD)ELISA 試劑盒

Rat angiotensin I (Ang- I) ELISA Kit 大鼠血管緊張素Ⅰ(Ang-Ⅰ)檢測試劑盒

Humanai-doublesandedDNA,dsDNAELISAKIT 人抗雙鏈DNA抗體/天然DNA抗體(dsDNA)檢測試劑盒 進口分裝

HumanCyclin-dependekinase1,CDK-1檢測試劑盒人周期素依賴性激酶1(CDK-1)檢測試劑盒

組織GRK4α激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20次

HumanPrednisolone,PSELISAKit人龍(PS)檢測試劑盒

THPO重組小鼠 Thrombopoietin / THPO / TPO 蛋白 (His 標簽) Protein

ChRM2 (Muscarinic Acetylcholine receptor M2 0.5mgChRM2 (Muscarinic Acetylcholine receptor M2) 毒蕈堿型乙酰受體M2(抗原)

ELK1重組人 ELK1 蛋白 (His & GST 標簽) Protein

AK2 Protein Human 重組人 AK2 / Adenylate kinase 2 蛋白 (His & GST 標簽)

FGFR4 Protein Mouse 重組小鼠 FGFR4 / CD334 蛋白 (His & Fc 標簽)

ChRM2 (Muscarinic Acetylcholine receptor M2 0.5mgChRM2 (Muscarinic Acetylcholine receptor M2) 毒蕈堿型乙酰受體M2(抗原)

AK2 Protein Human 重組人 AK2 / Adenylate kinase 2 蛋白 (His & GST 標簽)

THPO重組小鼠 Thrombopoietin / THPO / TPO 蛋白 (His 標簽) Protein

FGFR4 Protein Mouse 重組小鼠 FGFR4 / CD334 蛋白 (His & Fc 標簽)

ELK1重組人 ELK1 蛋白 (His & GST 標簽) Protein

豬白介素17(IL-17)ELISA 試劑盒

Human ai Sc1-70 aibody (Sc1-70-Ab) ELISA Kit 人抗Sc1-70抗體(Sc1-70-Ab)檢測試劑盒

Porcineleukemiainhibitoryfactorreceptor,LIFRELISAKit 豬白血病抑制因子受體(LIFR)檢測試劑盒 進口分裝

CLIAKitforAIF(Mouseapoptosisinducingfactor)ELISAKit小鼠凋亡誘導(dǎo)因子

血液/活化II(THROMBIN/FACTORIIa)活性比色法定量檢測試劑盒20次

Mouseulasensitivethyroid-stimulatinghormone,U-TSHELISAKit小鼠高靈敏度促甲狀腺激素(U-TSH)檢測試劑盒

人增生性瘢痕成纖維細胞中文名稱   方法   規(guī)格

大鼠過敏毒素/補體片斷4a(C4a)ELISAKit   ELISA. 

大鼠過敏毒素/補體片斷4a(C4a)ELISAKit   ELISA. 

大鼠補體片斷5a(C5a)ELISAKit   ELISA.