人中性粒細胞彈性蛋白酶_Neutrophil Elastase ELISA試劑盒
QY-RM01004 人中性粒細胞彈性蛋白酶ELISA試劑盒 human Neutrophil Elastase ELISA Kit
人中性粒細胞彈性蛋白酶_Neutrophil Elastase ELISA試劑盒組織勻漿液的制備
①、手工勻漿:取組織塊(0.2g~0.5g)在冰冷的勻漿介質(zhì)中漂洗,濾紙拭干,準確稱重,放
入勻漿管中,按重量(g):體積(ml)=1:4 的比例加入 4 倍體積的勻漿介質(zhì)于勻漿管中,冰水
浴條件下,用眼科小剪盡快剪碎組織塊,將玻璃勻漿管置于冰水浴條件,手動勻漿,30 秒/
次,間隔 30秒,重復(fù) 6~8 次,制成20%的勻漿液。
②、機器勻漿:取組織塊(0.2g~0.5g)在冰冷的勻漿介質(zhì)中漂洗,濾紙拭干,準確稱重,放
入勻漿管中,按重量(g):體積(ml)=1:4 的比例加入 4 倍體積的勻漿介質(zhì)于勻漿管中,冰水
浴條件下,用眼科小剪盡快剪碎組織塊,機械式勻漿機(組織搗碎機或內(nèi)切式勻漿機) ,
10000~15000 轉(zhuǎn)/分,冰水浴條件下,15 秒/次,間隙 30 秒,連續(xù) 3~5 次,制成 20%的勻漿液。
③、液氮研磨:取組織塊(0.2g~0.5g)在冰冷的勻漿介質(zhì)中漂洗,濾紙拭干,準確稱重,放
入研缽中,用眼科小剪盡快剪碎組織塊,加入液氮研磨至粉末狀(研磨要迅速),加入勻漿
介質(zhì),充分抽提,制備成 20%的勻漿液。 鏡檢觀察:取少量組織勻漿作涂片,顯微鏡下觀察細胞是否破碎,若沒有則可延長勻漿時間。
勻漿上清液的制備:將制備好的 20%勻漿液用普通離心機或低溫低速離心機 3500 轉(zhuǎn)/分左右,離
心 10~15 分鐘,取上清液進行測定.
人中性粒細胞彈性蛋白酶_Neutrophil Elastase ELISA試劑盒樣本保存:
植物組織樣本暫時不測定,可立即低溫凍存,溫度越低越好,中間如*凍融,-20℃以下
可保存三個月,-70℃以下可保存六個月。
制備好的勻漿液建議不要凍存,當天進行測定,如放置時間過長相關(guān)酶活會有所下降,部
分指標 4℃可存放 3~5 天(如 SOD 要存放 2~3 天,MDA 可存放 3~5,總蛋白測定可存 5~7 天等)
如指標太多可將勻漿上清液分裝保存,每次測定時每個樣本取出一管用于測定,切勿反復(fù)凍
融。 [注]:磷酸鹽緩沖液作為勻漿介質(zhì),不可用于無機磷、ATP酶、ATP 含量、羥自由基等相關(guān)檢測項目;
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