4T1 細胞
細胞介紹
4T1是從410.4瘤株中未經誘變篩得的6-硫鳥嘌噙抗性細胞株。當注射到BALB/c 小鼠中時,4T1自發(fā)產生高轉移腫瘤,可轉移到肺,肝,淋巴結和大腦,同時在 注射部位形成始發(fā)灶。誘導轉移時不需要摘除始發(fā)灶。4T1細胞在BALB/c小鼠 中的生長與轉移特性與人體中的癌十分相近。這種腫瘤是人VI期癌的 動物模型。4T1-誘導的腫瘤在手術后及未手術情況下轉移的動力學相近,可以用 作手術后及未手術模型。跟其他腫瘤模型相比,由于4T1的抗6-硫鳥嘌噙特性, 微小的轉移細胞團(少到僅僅1個)也可以在許多遠端器官中檢測到。
細胞特性
1)來源:小鼠癌
2)形態(tài):上皮細胞樣
3)含量:>lxl06 個/mL
4)污染:支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性
5)規(guī)格:T25瓶或者lmL凍存管包裝
運輸和保存:使用含有優(yōu)質胎牛血清的2ml凍存管發(fā)送存活細胞。收到細胞后, 可在1000RPM,常溫條件下,離心5min后,于潔凈操作臺棄去上清,加入* 使用的培養(yǎng)基后轉移至l〇cm培養(yǎng)皿或者T25培養(yǎng)瓶中培養(yǎng),傳代達到細胞生長 狀態(tài)良好時,再進行凍存。具體操作見細胞培養(yǎng)步驟。
細胞用途:僅供科研使用。
4T1 細胞
細胞培養(yǎng)步驟
1)培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1.準備 RPIVM-1640 培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號 21875-091),90%;優(yōu)質胎牛
血清,10%。
2.培養(yǎng)條件:氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱 濕度為70%-80%。
3. 凍存液:90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,現用現配。液氮儲存。
2)細胞處理:
復蘇細胞:將含有l(wèi)mL細胞懸液的凍存管在37°C水浴中迅速搖晃解凍,加 入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補 加l-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或將 細胞懸液加入l〇cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢 查細胞密度。
細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
4T1 細胞
對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:
棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
力口 2m丨消化液(0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37°C培
養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部 分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止 消化。
按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分 鐘,棄去上清液,補加l-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
將細胞懸液按1: 2到1: 5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者 瓶中。
細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時,棄 去培養(yǎng)基后加入少量*,細胞變圓脫落后,加入約lml含血清的培養(yǎng)基后 加入凍存管中,再添加1〇%DMSO后進行凍存。
注意事項:
收到細胞后,若發(fā)現干冰己揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染,請立 即與我們。
所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級生物安全臺內操作,并請注 意防護,所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。