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時間：2017-11-8閱讀：219

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一、實驗意圖
1.深化了解ELISA試劑盒法測定抗體效價的原理。

2.掌握ELISA 法測定單克隆抗體效價的方法。

二、實驗原理
ELISA試劑盒是以免疫學(xué)反應(yīng)為根底，將抗原、抗體的特異性反應(yīng)與酶對底物的催化作用相結(jié)合起來的一種敏感性很高的實驗技術(shù)。免疫酶技術(shù)是將酶標(biāo)記在抗體/抗原分子上，形成酶標(biāo)抗體/酶標(biāo)抗原，稱為酶結(jié)合物。該酶結(jié)合物的酶在免疫反應(yīng)后，作用于底物使之呈色，根據(jù)顏色的有無和深淺，定位或定量抗原/抗體。ELISA 法是免疫酶技術(shù)的一種，其特點是利用聚苯乙烯微量反應(yīng)板(或球)吸附抗原/抗體，使之固相化，免疫反應(yīng)和酶促反應(yīng)都在其間進(jìn)行。在每次反應(yīng)后都要反復(fù)洗刷，這既確保了反應(yīng)的定量，也避免了末反應(yīng)的游離抗體/抗原的分別進(jìn)程。在ELISA 法中.酶促反應(yīng)只進(jìn)行一次，而抗原的免疫反應(yīng)可進(jìn)行一次或數(shù)次，即可用二抗(抗抗體)、三抗再次進(jìn)行免疫反應(yīng)。
現(xiàn)在常用的幾種ELISA 方法有：測定抗體的直接法，測定抗原的雙抗體夾心法和測定抗原的競爭法等。本實驗選用直接法測定單克隆抗體效價。其主要進(jìn)程為：首先將已知定量抗原吸附在聚苯乙烯微量反應(yīng)板的凹孔內(nèi)，加待測抗體，保溫后洗刷以除去未結(jié)合的雜蛋白質(zhì)，加酶標(biāo)抗抗體，保溫后洗刷，加底物保溫30分鐘后，加酸或堿中止酶促反應(yīng)，用目測或光電比色測定抗體含量。

 

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