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上海酶聯(lián)生物研究所

elisa試劑盒實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn)總結(jié)

時(shí)間:2017-11-7閱讀:199
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ELISA試劑盒包被原的性質(zhì)很重要,蛋白濃度,是不是降解,這聯(lián)絡(luò)到你做出的抗體可不能夠被其辨認(rèn),所以保管抗原很重要,我做重組蛋白時(shí),師兄都嚴(yán)峻警告我必定要在冰浴下緩慢融化就是這個(gè)道理。還有有的包被原能夠不是蛋白,關(guān)于*和脂類物質(zhì)或小分子物質(zhì)我們要事前對(duì)其改造再加以包被,列出如下:


①親和素*:先親和素先包被載體,參與*化的DNA,這種包被辦法均勻、強(qiáng)健,已擴(kuò)展應(yīng)用于各種抗原物質(zhì)的定量測(cè)定。


②脂類物質(zhì):可將其在有機(jī)溶劑(例如乙醇)中溶解后參與ELISA板孔中,開蓋置冰箱或涼風(fēng)吹干,待酒精蒸發(fā)后,讓脂質(zhì)天然干固在固相外表。


③小分子有ELISA試劑盒必要依托和大的蛋白載體偶聯(lián)后才調(diào)固定在固相載體上。
包被液的選擇,一般選擇ph9.6的碳酸鹽緩沖液。但有時(shí)因?yàn)閷?shí)驗(yàn)的需求,包被原的特殊性也能夠選用中性的緩沖溶液來包。應(yīng)留意以下原理:因?yàn)榈鞍踪|(zhì)與聚苯乙烯固相載體是經(jīng)過物理吸附聯(lián)絡(luò)的,靠的是蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)上的疏水基團(tuán)與固相載體外表的疏水基團(tuán)間的效果,這種物理吸附對(duì)錯(cuò)特異性的,受蛋白質(zhì)的分子量、等電點(diǎn)、濃度等的影響,大分子蛋白質(zhì)較小分子蛋白質(zhì)一般富含更多的疏水基團(tuán),故更易吸附到固相載體外表。詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)還要有穩(wěn)固的理論外也要實(shí)習(xí),看一下完畢可不能夠應(yīng)用到自個(gè)實(shí)驗(yàn)當(dāng)中去。常用的包被液除了方才說到的pH9.6碳酸鹽緩沖液,還有pH7.2的磷酸鹽緩沖液和pH7-8的Tris-HCL緩沖液等等。


ELISA試劑盒關(guān)閉:繼包被之后用高濃度的無關(guān)蛋白質(zhì)溶液再包被的進(jìn)程。關(guān)閉就是讓許多不相關(guān)的蛋白質(zhì)充填這些空位,然后架空ELISA后的過程中干擾物質(zhì)的再吸附。常有:0.05%-0.5%的小牛血清或1%明膠;脫脂奶粉,比照價(jià)廉,能夠高濃度運(yùn)用(5%-10%);還有一些稀有用到的各種動(dòng)物血清(首要為了清掃類似蛋白干擾)和酪蛋白等等。但完畢選用啥,要根據(jù)實(shí)驗(yàn)詳細(xì)來實(shí)習(xí)。

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