葡萄糖6磷酸酶G6P測試盒_糖異生系列_分光法
測定方法：分光光度法
產(chǎn)品規(guī)格：50管/48樣
注 意 ：正式測定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定
測定意義：
葡萄糖-6-磷酸酶（(glucose 6 phosphatase，G6Pase，EC 3.1.3.9）廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和細(xì)胞中，是糖異生過程水解葡萄糖-6-磷酸生成葡萄糖的限制酶，在保證血糖的動(dòng)態(tài)平衡方面起著重要的作用。
測定原理：
G6P催化葡萄糖-6-磷酸生成葡萄糖，變旋酶和葡萄糖脫氫酶進(jìn)一步依次催化NAD+還原生成NADH，在340nm下測定NADH生成速率，即可反映G6P活性。
需自備的儀器和用品：
紫外分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1 mL石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
試劑的組成和配制：
提取液：60mL×1瓶，4℃保存；
試劑一：液體47.5 mL×1瓶， 4℃保存；
試劑二：粉劑×1支，-20℃保存；
試劑三：粉劑×1支，-20℃保存；
試劑四：試劑×1支，-20℃保存；
葡萄糖6磷酸酶G6P測試盒_糖異生系列_分光法
樣本的前處理：
1、細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL提取液），超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次）；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
2、組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
3、血清（漿）樣品：直接檢測。
測定步驟：
1、分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至340nm，蒸餾水調(diào)零。
2、工作液的配制：臨用前將試劑二、試劑三和試劑四轉(zhuǎn)移到試劑一中混合溶解待用；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。
3、將工作液置于37℃(哺乳動(dòng)物)或25℃(其它物種)預(yù)熱5分鐘。
4、 在1mL石英比色皿中加入50μL樣本和950μL工作液，立即混勻，記錄340nm處初始吸光值A(chǔ)1和 2min后的吸光值A(chǔ)2，計(jì)算ΔA=A2-A1。
注意：在該試劑盒中，若ΔA大于0.3，需將樣本用提取液稀釋適當(dāng)倍數(shù)后測定，使ΔA小于0.3可提高檢測
靈敏度。計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。
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