糖異生系列_葡萄糖6磷酸酶G6P測試盒_微量法
測定方法：微量法
產品規(guī)格：100管/96樣
注 意 ：測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定
測定意義：
葡萄糖-6-磷酸酶（(glucose 6 phosphatase，G6Pase，EC 3.1.3.9）廣泛存在于動物、植物、微生物和細胞中，是糖異生過程水解葡萄糖-6-磷酸生成葡萄糖的限制酶，在保證血糖的動態(tài)平衡方面起著重要的作用。
糖異生系列_葡萄糖6磷酸酶G6P測試盒_微量法
測定原理：
G6P催化葡萄糖-6-磷酸生成葡萄糖，變旋酶和葡萄糖脫氫酶進一步依次催化NAD+還原生成NADH，在340nm下測定NADH生成速率，即可反映G6P活性。
需自備的儀器和用品：
分光光度計/酶標儀、臺式離心機、可調式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。
試劑的組成和配制：
提取液：100mL×1瓶，4℃保存；
試劑一：液體19 mL×1瓶， 4℃保存；
試劑二：粉劑×1支，-20℃保存；
試劑三：粉劑×1支，-20℃保存；
試劑四：試劑×1支，-20℃保存；
樣本的前處理：
1、細菌或培養(yǎng)細胞：先收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；按照細菌或細胞數(shù)量（104個）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細菌或細胞加入1mL提取液），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復30次）；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
2、組織：按照組織質量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液），進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
3、血清（漿）樣品：直接檢測。
測定步驟：
1、分光光度計或酶標儀預熱30min以上，調節(jié)波長至340nm，蒸餾水調零。
工作液的配制：臨用前將試劑二、試劑三和試劑四轉移到試劑一中混合溶解待用；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復凍融。
2、將工作液置于37℃(哺乳動物)或25℃(其它物種)預熱5分鐘。
3、在微量石英比色皿或96孔板中加入10μL樣本和190μL工作液，立即混勻，記錄340nm處初始吸光值A1和 2min后的吸光值A2，計算ΔA=A2-A1。
注意：在該試劑盒中，若ΔA大于0.3，需將樣本用提取液稀釋適當倍數(shù)后測定，使ΔA小于0.3可提高檢測靈敏度。計算公式中乘以相應稀釋倍數(shù)。
環(huán)保在線