乙醛脫氫酶(ALDH)測試盒(輔酶Ⅰ系列)
測定方法:分光光度法
產(chǎn)品規(guī)格:50管/48樣
注 意:正式測定之前選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。
測定意義:
乙醛脫氫酶 (EC 1.2.1.10)是醛脫氫酶的一種,廣泛存在于各種動物、植物和微生物體內(nèi)。主要作用是將乙醛氧化成乙酸,在酒精代謝中起主要作用。在人類和許多動物體內(nèi),線粒體乙醛脫氫酶能把對生物體有害的醇類轉(zhuǎn)化,所以在細(xì)胞解毒研究中乙醛脫氫酶受到高度關(guān)注;同時,乙醛脫氫酶在分子生物學(xué)以及相關(guān)疾病的檢測方面有較廣泛的研究應(yīng)用。
乙醛脫氫酶(ALDH)測試盒(輔酶Ⅰ系列)
測定原理:
在輔酶Ⅰ存在的條件下,乙醛脫氫酶催化乙醛和NAD+轉(zhuǎn)化為乙酸和NADH,在340nm處的吸光值會增加,測定340nm處的吸光值變化,可計算得到乙醛脫氫酶的活性。
自備實驗用品及儀器:
天平、離心機、恒溫水浴鍋、紫外分光光度計、1mL石英比色皿、蒸餾水。
試劑組成和配制:
提取液:液體50mL×1瓶,4℃保存。
試劑一:液體15mL×1瓶,4℃保存。
試劑二:液體5mL×1瓶,4℃避光保存。
試劑三:液體3mL×1瓶,4℃避光保存。
試劑四:液體2mL×1支,4℃保存。
試劑五:液體2mL×1支,4℃保存。
ALDH提取:
1.組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液)進(jìn)行冰浴勻漿,然后,10000g,4℃,離心20min。
2.細(xì)胞:按照細(xì)胞數(shù)量(104個):提取液體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細(xì)胞加入1mL提取液),冰浴超聲波破碎細(xì)胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時間3min);然后10000g,4℃,離心10min,取上清置于冰上待測。
3.液體:直接檢測。