乳酸脫氫酶(LDH)測試盒(輔酶Ⅰ系列)分光法
測定方法:分光光度法
產(chǎn)品規(guī)格:50管/24樣
注 意:正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定
測定意義:
LDH(EC 1.1.1.27)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中,是糖酵解途徑的末端酶,催化丙酮酸與乳酸之間的可逆反應,伴隨著NAD+/NADH之間互變。
測定原理:
LDH催化NAD+氧化乳酸生成丙酮酸,丙酮酸進一步與2, 4 - 二硝基苯肼作用生成丙酮酸二硝基苯腙,在堿性溶液中顯棕紅色,顏色深淺與丙酮酸濃度成正比。
需自備的儀器和用品:
可見分光光度計、恒溫水浴鍋、臺式離心機、可調(diào)式移液器、1 mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
試劑的組成和配制:
提取液:30mL×1瓶, 4℃保存;
試劑一:液體15 mL×1瓶, 4℃保存;
試劑二:粉劑×1支,-20℃保存,用時加入10μL試劑五和1.3 mL蒸餾水充分溶解備用,用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復凍融;
試劑三:液體15 mL×1瓶,4℃保存;
試劑四:液體50 mL×1瓶,4℃保存;
試劑五:液體100μL×1支,4℃保存;
乳酸脫氫酶(LDH)測試盒(輔酶Ⅰ系列)分光法
樣品測定的準備:
1、細菌、細胞或組織樣品的制備:
細菌或培養(yǎng)細胞:先收集細菌或細胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細菌或細胞數(shù)量(104個):提取液體積(mL)為1000~5000:1的比例(建議2000萬細菌或細胞加入1mL提取液),超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復30次);8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液),進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
2、血清(漿)樣品:直接檢測。