乙醛酸循環(huán)系列_蘋果酸合酶(MS)測試盒
測定方法：微量法
產(chǎn)品規(guī)格：100管/96樣
注 意：正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定
測定意義：
蘋果酸合酶（MS，EC 4.1.3.2）是屬于轉移酶中?；D移酶的一類，主要存在于植物和微生物中。MS 是乙醛酸循環(huán)的關鍵酶之一，在 MS 催化下乙醛酸與乙酰輔酶 A 反應生成蘋果酸。
測定原理：
MS 催化乙酰 CoA 和乙醛酸產(chǎn)生蘋果酸，同時生成輔酶 A，輔酶 A 使無色的 DTNB 轉變成的 TNB，在 412nm 處有特征吸光值。
需自備的儀器和用品：
酶標儀、臺式離心機、水浴鍋、可調式移液器、96 孔板、研缽、冰、和蒸餾水
乙醛酸循環(huán)系列_蘋果酸合酶(MS)測試盒
試劑組成和配制：
試劑一：液體 120 mL×1 瓶，4℃保存；
試劑二：液體 10 mL×1 瓶，4℃保存；
試劑三：粉劑×1 瓶，-20℃保存；臨用前加入 10mL 試劑一充分溶解后使用，用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復凍融；
試劑四：粉劑×1 瓶，4℃保存；臨用前加入 2.4mL 試劑一充分溶解后使用，用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復凍融；
樣本的前處理：
1、細菌或培養(yǎng)細胞：先收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；按照細菌或細胞數(shù)量（104 個）：試劑一體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細菌或細胞加入 1mL 試劑一），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率 20％或 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復 30 次）；8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。
2、組織：按照組織質量（g）：試劑一體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 試劑一），進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。
測定步驟：
1、酶標儀預熱 30min 以上，調節(jié)波長至 412nm。
2、樣本測定
在96 孔板中依次加入 20μL 樣本、80μL 試劑二，80μL 試劑三和 20μL 試劑四，混勻，立即記錄 412 nm 處反應 5min 時的吸光值 A1 和 10min 時的吸光值 A2，計算 ΔA=A2-A1。
環(huán)保在線