小鼠色素上皮衍生因子（PEDF）ELISA試劑盒基因工程試劑對免疫測定技術發(fā)展的影響
     免疫測定技術的基礎在于抗原抗體之間的特異結(jié)合反應，所以任何優(yōu)質(zhì)的診斷試劑離不開優(yōu)質(zhì)的原料，如抗原抗體，酶等。以前用于免疫測定的抗原通常為各種純化抗原，而抗體則為純化抗原免疫動物后獲得的多克隆抗體和使用雜交瘤技術得到的單克隆抗體，而抗原或抗體的標記物如酶標結(jié)合物則通過各種化學合成方法制備。近年來，隨著分子生物學的發(fā)展，使用基因工程方法制備各種特殊的抗原或抗體及其酶結(jié)合物等免疫測定試劑幾成為現(xiàn)實的新一代試劑，各種新型使用的測定方法也不斷出現(xiàn)。
小鼠色素上皮衍生因子（PEDF）ELISA試劑盒HBsAg試劑特點（檢測模式：臨床抗體夾心法）：包被抗體為山羊多抗。多抗具有高親和性和對抗原各種表位的反應性。酶表抗體為與HBsAg有不同結(jié)合位點的鼠復合單位，可測得HBsAg變異樣品，提高檢測的特異性（99.98%）提高檢測的靈敏度，應用Parl Ehrich 學說（PEI）HBsAg標準品，對ad標準品的靈敏度為0.05ng/ml對ay標準品靈敏度為0.025ng/ml
方法一　雙抗體夾心法
　　1.　包被：用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1～10μg/ml。在每個聚苯乙烯板的反應孔中加0.1ml，4℃ 過夜。次日，棄去孔內(nèi)溶液，用洗滌緩沖液洗3次，每次3分鐘。（簡稱洗滌，下同）。
　　　2.　加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應孔中，置37℃ 孵育1小時。然后洗滌。（同時做空白孔，陰性對照孔及陽性對照孔）。
　　　3.　加酶標抗體：于各反應孔中，加入新鮮稀釋的酶標抗體（經(jīng)滴定后的稀釋度）0.1ml。37℃ 孵育0.5～1小時，洗滌。
　　　4.　加底物液顯色：于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分鐘。
　　　5.　終止反應：于各反應孔中加入2M硫酸0.05ml。
　　　6.　結(jié)果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結(jié)果：反應孔內(nèi)顏色越深，陽性程度越強，陰性反應為無色或極淺，依據(jù)所呈顏色的深淺，以“+”、“-”號表示。也可測OD值：在ELISA檢測儀上，于450nm（若以ABTS顯色，則410nm）處，以空白對照孔調(diào)零后測各孔OD值，若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍，即為陽性。
PLC/PRF/5（肝癌亞力山大）  大腸癌專一抗原4（CCSA-4） 假定蛋白LOC677340
SW579（人甲狀腺癌）  粘蛋白/粘液素5B（MUC5B） 假定蛋白LOC433328
RKO（結(jié)腸腺癌）  腸三葉因子（ITF） 髓樣分化因子初次應答基因88（MYD88）
FaDu（人咽鱗癌）  Dickkopf 1（DKK1） 干擾素活化基因205（Ifi205）
NCI-N87（人胃癌）  *11（KLK 11） 組織相容性2-K1-K 區(qū)（H2-K1）
DT40（雞淋巴瘤）  生長調(diào)節(jié)致癌基因γ/黑素瘤生激因子（GROγ/CXCL3/MGSA） 白免疫球蛋白樣受體亞家族B成員4（LILRB4）
對于定量檢測來說，主要還是一個準確度的驗證。不過我看到別人寫的內(nèi)容比我自己想說的要好，所以就貼上去了。相對回收率可能會高于*的，如果只是說“損失程度”，其實是不準確的。應該說，回收率越接近*，說明這個試劑盒的準確度越高。

Elisa的發(fā)展