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上海哈靈生物科技有限公司
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植物組織膜性囊泡（RSOV 和 IOV）制備試劑盒產(chǎn)品說明書
2024-12-19 閱讀(49)
一、主要用途
上海哈靈生物植物組織膜性囊泡（RSOV 和 IOV）制備試劑是一種旨在通過差速離心技術(shù)從植物組織中分離出各種正常外向膜性囊泡（Right - side out；RSOV）和內(nèi)側(cè)外翻膜性囊泡（In - side out；IOV）組分的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實驗證明。其適合于各種植物組織，包括種子（seed）、葉片（leaf）、根（root）、胚胎葉（cotyledon）、上胚軸（epicotyl）等膜性囊泡的制備。其制備物產(chǎn)量高，可用于膜通道、信號傳導機制、膜蛋白分布等研究。產(chǎn)品不含污染性蛋白酶，即到即用，性能穩(wěn)定，分離產(chǎn)量和純度俱佳。
二、技術(shù)背景
上海哈靈生物膜性囊泡（membrane vesicle）分成正常外向膜性囊泡（Right - side out；RSOV）和內(nèi)側(cè)外翻膜性囊泡（In - side out；IOV）。正常外向膜性囊泡是通過去除細胞漿內(nèi)容物，使之失去內(nèi)在的代謝系統(tǒng)，同時保持質(zhì)膜的原始位相，有利于提供適合的底物，不會受到降解和代謝，建立動力機制，進行轉(zhuǎn)運或攝入研究，例如微粒體組分用于 V 型 ATP 酶研究、線粒體組分用于 F 型 ATP 酶研究。而內(nèi)側(cè)外翻膜性囊泡是通過裂解細胞和細胞器后，質(zhì)膜重新閉合形成內(nèi)側(cè)面外翻的囊泡狀結(jié)構(gòu)，廣泛用于原發(fā)性轉(zhuǎn)運系統(tǒng)的研究。
三、產(chǎn)品內(nèi)容
清理液（Reagent A）：[X] 毫升
平衡液（Reagent B）：[X] 毫升
保存液（Reagent C）：[X] 毫升
產(chǎn)品說明書：1 份
四、保存方式
保存保存液（Reagent C）在－20℃冰箱里。
其余的保存在 4℃冰箱里；有效保證 6 月。
五、用戶自備
15 毫升錐形離心管：用于樣品操作的容器。
1.5 毫升離心管：用于樣品操作和保存的容器。
4℃超速離心機：用于分離膜性囊泡。
DOUNCE 勻漿器：用于裂解組織。
六、實驗步驟
（一）正常外向膜性囊泡分離（線粒體和微粒體）
準備好新鮮的植物組織（葉片、谷粒、種子等），并秤重以確定 1 克組織重量。
（選擇步驟）放進預冷的 15 毫升錐形離心管。
（選擇步驟）加入 xx 毫升清理液（Reagent A）清洗 1 次。
移入一個液氮凍存管。
即刻放入液氮罐過夜。
次日從液氮罐里取出，即刻（最快速度）碾碎組織成粉末（注意：切莫使組織凍融）。
放進一個 15 毫升錐形離心管。
加入 xx 毫升預冷的平衡液（Reagent B）。
渦旋震蕩 5 秒，充分混勻。
即刻放入預冷的 DOUNCE 勻漿器。
在冰槽里用研磨棒勻化組織（約 80 下）。
將所有組織勻漿物移入 15 毫升錐形離心管。
放進 4℃臺式離心機離心 10 分鐘，速度為 1000g。
小心移出上清液到另一個新的預冷的 15 毫升錐形離心管。
放進 4℃臺式離心機離心 10 分鐘，速度為 10000g。
小心移出上清液到 2 個新的 1.5 毫升離心管，同時保留沉淀顆粒。
加入 xx 微升保存液（Reagent C）到沉淀顆粒管――
將含有上清液的 2 個 1.5 毫升離心管放進 4℃超速離心機離心 60 分鐘，速度為 100000g。
小心抽去上清液。
分別加入 xx 微升保存液（Reagent C）――
移取 10 微升進行蛋白質(zhì)定量測定（注意：建議使用 Bradford 蛋白質(zhì)濃度定量試劑盒－30030.1）。
即刻放進－70℃冰箱里保存。
（二）內(nèi)側(cè)外翻膜性囊泡分離（質(zhì)膜分離）
準備好新鮮的植物組織（葉片、谷粒、種子等），并秤重以確定 1 克組織重量。
（選擇步驟）放進預冷的 15 毫升錐形離心管。
（選擇步驟）加入 xx 毫升清理液（Reagent A）清洗 1 次。
移入一個液氮凍存管。
即刻放入液氮罐過夜。
次日從液氮罐里取出，即刻（最快速度）碾碎組織成粉末（注意：切莫使組織凍融）。
放進一個 15 毫升錐形離心管。
加入 xx 毫升預冷的平衡液（Reagent B）。
渦旋震蕩 5 秒，充分混勻。
即刻放入預冷的 DOUNCE 勻漿器。
在冰槽里用研磨棒勻化組織（約 80 下）。
將所有組織勻漿物移入 15 毫升錐形離心管。
放進 4℃臺式離心機離心 10 分鐘，速度為 1000g。
小心移出上清液到另一個新的預冷的 15 毫升錐形離心管。
放進 4℃臺式離心機離心 30 分鐘，速度為 10000g。
小心抽去上清液。
加入 xx 微升保存液（Reagent C）――
連續(xù)－70℃至 37℃凍融 4 次――
移取 10 微升進行蛋白質(zhì)定量測定（注意：建議使用 Bradford 蛋白質(zhì)濃度定量試劑盒－30030.1）。
即刻放進－70℃冰箱里保存。
（選擇步驟）進行 IOV 組分純化（建議使用 IOV 膜性囊泡高質(zhì)純化試劑盒－10170）。
七、注意事項
本產(chǎn)品為 20 次（1 克植物組織）操作。
所有操作均須在 4℃或以下狀態(tài)進行。
建議使用足夠的樣品量。
通常 1 克植物組織的微粒體組分含量為 50 毫克蛋白，線粒體組分含量 5 毫克蛋白，100 毫克質(zhì)膜。
質(zhì)膜 IOV 組分為粗提分離產(chǎn)物，其中含有 RSOV 和未予閉合的質(zhì)膜不等，如果需要獲得 95％以上的高純度的 IOV，建議使用 IOV 膜性囊泡高質(zhì)純化試劑盒－10170。
純化的樣品避免反復凍融。
本公司提供系列離子膜通道轉(zhuǎn)運功能（transport/uptake）分析試劑產(chǎn)品。
八、質(zhì)量標準
本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定。
本產(chǎn)品經(jīng)鑒定分離組分維持正?；钚浴?/span>
本產(chǎn)品經(jīng)鑒定不含污染性蛋白酶和核酶。
