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組織甘油-3-磷酸脫氫酶總活性光度法試劑盒樣品準備
2024-12-19 閱讀(28)
組織甘油-3-磷酸脫氫酶總活性光度法是一種精確的實驗技術(shù)，用于定量檢測動物組織中的甘油-3-磷酸脫氫酶活性。以下是使用上海語燕生物提供的定量檢測試劑盒(產(chǎn)品貨號：HL50378.2)進行樣品準備的詳細步驟：
樣品準備步驟
組織采集與稱重：手術(shù)取出動物組織，并準確秤重，確保組織重量在200至500毫克之間，以滿足實驗需求。
預(yù)冷處理：選擇將組織放入預(yù)冷的15毫升錐形離心管中，以保持組織的低溫狀態(tài)，防止酶活性變化。
組織清洗：選擇加入上海語燕生物提供的清理液(Reagent A)清洗組織一次，以去除可能影響實驗結(jié)果的雜質(zhì)。
液氮凍存：將清洗后的組織移入液氮凍存管中，以保持組織的活性和穩(wěn)定性。
液氮冷凍：將組織即刻放入液氮罐中過夜，以確保組織在極低溫度下保持其生物活性。
組織研磨：次日從液氮罐中取出組織，以最快速度用研磨棒碾碎成粉末狀，注意避免組織凍融，以免影響實驗結(jié)果。
組織轉(zhuǎn)移：將研磨后的組織粉末轉(zhuǎn)移到15毫升錐形離心管中，為下一步裂解做好準備。
裂解液添加：加入預(yù)冷的裂解液(Reagent B)，根據(jù)上海語燕生物的推薦量，精確控制裂解液的體積。
樣品轉(zhuǎn)移：將裂解后的樣品轉(zhuǎn)移到預(yù)冷的1.5毫升離心管中，以便于后續(xù)操作。
渦旋震蕩：強力渦旋震蕩樣品30秒，確保樣品充分混勻，以便于裂解液與組織充分接觸。
冰槽孵育：將樣品置于冰槽中孵育30分鐘，期間每10分鐘進行強力渦旋震蕩30秒，以保持樣品的低溫狀態(tài)。如需暫時停止操作，應(yīng)將樣品存放于-70℃冰箱中。
離心分離：將樣品放入4℃的微型臺式離心機中，以16000g(或13000RPM，如使用Eppendorf 5415型號離心機)的速度離心5分鐘，以分離上清液和沉淀物。
上清液轉(zhuǎn)移：小心移取500微升上清液到新的預(yù)冷的1.5毫升離心管中，以便于后續(xù)的蛋白定量檢測。
蛋白定量檢測：移取10微升上清液進行蛋白定量檢測，建議使用上海語燕生物提供的Bradford蛋白質(zhì)濃度定量試劑盒(貨號：30030.1)進行操作。
樣品保存：將剩余樣品即刻放入-70℃冰箱保存，或置于冰槽中繼續(xù)后續(xù)操作，以保持樣品的穩(wěn)定性和活性。
以上步驟詳細描述了使用上海語燕生物的定量檢測試劑盒(產(chǎn)品貨號：HL50378.2)進行組織甘油-3-磷酸脫氫酶總活性光度法樣品準備的過程。遵循這些步驟，可以確保實驗的準確性和可靠性，為后續(xù)的實驗分析打下堅實的基礎(chǔ)。
