關(guān)于客戶在收到細(xì)胞后正確的處理方法

子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞，Ishikawa細(xì)胞

 有經(jīng)驗(yàn)和剛剛從事細(xì)胞培養(yǎng)工作的人員都應(yīng)該認(rèn)真仔細(xì)地詢問下細(xì)胞提供方提供的建議，提前了解所要培養(yǎng)細(xì)胞的詳細(xì)資料，準(zhǔn)備好細(xì)胞所要用到的培養(yǎng)基和相關(guān)試劑，雖然所有的貼壁，半貼壁或者懸浮細(xì)胞處理方式差不多，但是不同的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)條件和處理力度還有試劑的批間差這些問題存在，也會(huì)導(dǎo)致對(duì)細(xì)胞處理不當(dāng)，或者環(huán)境的不適應(yīng)而造成細(xì)胞的死亡。

子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞，Ishikawa細(xì)胞

 1.收到細(xì)胞，*時(shí)間要鏡檢：觀察細(xì)胞形態(tài)是否正常，對(duì)于貼壁細(xì)胞則要注意看貼壁情況是否很好，觀察細(xì)胞密度，有疑議及時(shí)咨提供細(xì)胞的技術(shù)人員。由于運(yùn)輸?shù)臅r(shí)間或者溫度的變化，很多貼壁細(xì)胞在盛滿培養(yǎng)基的瓶子里生長(zhǎng)的狀態(tài)和平時(shí)會(huì)有點(diǎn)不一樣，主要是貼壁牢固問題。比如293T，平時(shí)貼壁就不是很牢，在裝滿的培養(yǎng)基瓶子里面，會(huì)發(fā)生大片的脫落，細(xì)胞聚集在一起，但是細(xì)胞生長(zhǎng)還是正常的，通過離心收集，加以*的消化，重新打散，又可以正常的貼壁生長(zhǎng)。

2.當(dāng)通過上一步的觀察，細(xì)胞初步?jīng)]有任何問題時(shí)，進(jìn)行下一步操作。當(dāng)收到的細(xì)胞密達(dá)到80%左右時(shí)，則處理如下：棄除瓶中大部分培養(yǎng)基，僅保留5到10mL培養(yǎng)所需的常規(guī)培養(yǎng)基；或更換新鮮的培養(yǎng)基，置于培養(yǎng)箱中，隨后每天觀察。細(xì)胞在低于正常生長(zhǎng)溫度情況下，會(huì)調(diào)整為靜止期，或者慢速生*，必須恢復(fù)37度的環(huán)境至少3個(gè)小時(shí)左右，才能重新調(diào)整到接近對(duì)數(shù)生*的狀態(tài)，在對(duì)數(shù)生*進(jìn)行細(xì)胞的傳代會(huì)大大增加傳代的成功率，和細(xì)胞的存活率。

3.如果經(jīng)*步觀察發(fā)現(xiàn)細(xì)胞密度超過90%，并且細(xì)胞狀態(tài)很好時(shí)，則復(fù)溫后2個(gè)小時(shí)需要立即傳代。傳代的比例應(yīng)依據(jù)不同的細(xì)胞而定。對(duì)于生長(zhǎng)比較快，狀態(tài)穩(wěn)定，不易受外界影響的細(xì)胞可以一次多傳幾瓶；對(duì)于生長(zhǎng)較慢，細(xì)胞比較薄，狀態(tài)容易波動(dòng)的細(xì)胞類型，一次少傳些，保證每瓶細(xì)胞密度大些，便于穩(wěn)定生長(zhǎng)。至于一些比較陌生的細(xì)胞，*次處理也可以依照第二種情況。

收到細(xì)胞后，在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)：

如果沒長(zhǎng)滿，將培養(yǎng)瓶用75%酒精消毒后在超凈臺(tái)內(nèi)更換新鮮培

養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)。

如果細(xì)胞已經(jīng)長(zhǎng)滿（約80%-90%）則傳代后繼續(xù)培養(yǎng)。

傳代方法：

1 棄去培養(yǎng)基，用不含鈣、鎂離子的PBS 洗1-2 次。

2 加1ml 0.25%的*（含0.02%EDTA），讓*與大部分細(xì)胞接觸后

放入37℃培養(yǎng)箱內(nèi)，隨時(shí)觀察細(xì)胞狀態(tài)變化，待細(xì)胞大部分變圓后加

*培養(yǎng)基終止消化。

3 一般沒有特殊說明，細(xì)胞一般是一傳二。

凍存方法：

70% *培養(yǎng)基，20%FBS，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。

儲(chǔ)存：液氮中*保存。

注1 觀察細(xì)胞在低倍鏡下觀察，便于整體估計(jì)細(xì)胞密度。

2 在運(yùn)輸過程中可能會(huì)導(dǎo)致一些貼壁不牢的細(xì)胞發(fā)生部分脫落，可離

心吹打后重新種入瓶中培養(yǎng)。

3 收到細(xì)胞后若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、細(xì)胞污染等，請(qǐng)及時(shí)與我們。

，還可供應(yīng)細(xì)胞如下：