Cell Navigator 活細(xì)胞微管蛋白染色試劑盒是美國(guó)AAT Bioquest生產(chǎn)的用于標(biāo)記活細(xì)胞的試劑盒，該試劑盒提供了一種可靠的方法，可以用Tubulite Red對(duì)活細(xì)胞中的微管蛋白進(jìn)行熒光成像。 該探針可透過(guò)活細(xì)胞，因此不需要固定細(xì)胞即可對(duì)微管蛋白進(jìn)行成像。 它可以方便地用于跟蹤活細(xì)胞中微管蛋白的聚合過(guò)程。 它的紅色光譜波長(zhǎng)和良好的細(xì)胞滲透性使該探針易于與其他顏色（如GFP表達(dá)的細(xì)胞）或核染料（如DAPI）一起使用。 中性的Tubulite Red容易穿過(guò)活細(xì)胞的質(zhì)膜。 親脂性封閉基團(tuán)一旦進(jìn)入細(xì)胞，就會(huì)被酯酶裂解，形成帶負(fù)電荷的產(chǎn)物，并充分保留在細(xì)胞內(nèi)部。百螢生物是AAT Bioquest的中國(guó)代理商，為您提供優(yōu)質(zhì)的Cell Navigator 活細(xì)胞微管蛋白染色試劑盒。
適用儀器
| 熒光顯微鏡 | |
| 激發(fā)： | Cy5濾波片組 |
| 發(fā)射： | Cy5濾波片組 |
| 推薦孔板： | 黑色透明 |
樣品實(shí)驗(yàn)方案
簡(jiǎn)要概述
1.用5×105至1×106細(xì)胞/ mL的密度制備含測(cè)試化合物的細(xì)胞
2.準(zhǔn)備Tubulite Red工作溶液并將其添加到細(xì)胞中
3.在37℃下孵育30至60分鐘
4.使用Cy5濾波片組讀取熒光強(qiáng)度
溶液配制
1.儲(chǔ)備溶液配制
所有未使用的儲(chǔ)備溶液應(yīng)分為一次性使用的等分試樣，并在制備后儲(chǔ)存在-20°C下。 避免重復(fù)凍融循環(huán)。
Tubulite Red儲(chǔ)備液（500X）：
將25 µL（Cat＃23170）或75 µL（Cat＃23171）DMSO（組分D）添加到Tubulite Red（組分A）小瓶中，并充分混合。 注意：分裝并在-20℃下存儲(chǔ)未使用的Tubulite Red儲(chǔ)備液。 避免重復(fù)冷凍/融化循環(huán)。
2.工作溶液配制
Tubulite Red工作溶液（1X）：
將2.5 µL Tubulite Red儲(chǔ)備液儲(chǔ)備溶液和100 µL 25 mM ReadiUse Probenecid（組分D）加入1 mL的測(cè)定緩沖液（組分B）或您選擇的緩沖液中，并充分混合。 注意：請(qǐng)保證Tubulite Red工作溶液新鮮。 工作溶液可以穩(wěn)定幾個(gè)小時(shí)。
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樣品示例及操作
2.除去細(xì)胞生長(zhǎng)培養(yǎng)基，并用PBS（未提供）或您選擇的任何其他緩沖液洗滌細(xì)胞。（可選的）。
3.加入100 µL Tubulite Red工作溶液，并在37oC培養(yǎng)箱中孵育30至60分鐘。 注意：適當(dāng)?shù)姆跤龝r(shí)間取決于所用的單個(gè)細(xì)胞類型和細(xì)胞濃度。 優(yōu)化每個(gè)實(shí)驗(yàn)的孵育時(shí)間。
4.除去工作溶液，并用PBS或您選擇的其他任何緩沖液（2.5毫安的Probenecid（從組分C稀釋））洗滌細(xì)胞兩次。
5.用含2.5 mMProbenecid的測(cè)定緩沖液（從組分C稀釋）覆蓋細(xì)胞，并使用Cy5濾光片組在熒光顯微鏡下監(jiān)控?zé)晒鈴?qiáng)度。
