實(shí)驗(yàn)方法學(xué)：
一、肝素的配制：
市售肝素凍干粉140單位/mg，1克瓶裝，每瓶140，000單位，稱取0.1克肝素凍干粉，加生理鹽水5ml，配成2800單位/ml。取50～100μl濕潤管壁，可抗凝人血3～5ml，血液不會凝固。老鼠血易凝固，所以最好更濃一些?？梢匀?.1克肝素凍干粉，加3ml生理鹽水溶解后，取50～100μl,可抗凝鼠血2～4ml。
肝素抗凝管的制備：取0.1克肝素凍干粉，加2.5ml生理鹽水。取100μl～150μl滴入塑料或玻璃管中，濕潤管壁，低于80℃小烤箱中（可以用烤面包的小烤箱），橫向轉(zhuǎn)動，每隔5～10分鐘轉(zhuǎn)動一次，直至干燥后放入4℃保存，可使2～5ml血液不凝固。
二、血液樣本的收集：
全血根據(jù)收集的條件，分成不抗凝和抗凝兩種。同時，不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清；抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。
1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1～2小時，直接低速離心分離出血清待用或保存。
2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血，輕輕顛倒充分抗凝后，可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征，選擇合適的抗凝劑。實(shí)驗(yàn)室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA及。
選擇抗凝的注意點(diǎn)：
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致，同時所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒，充分抗凝，防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對較多（1ml抗凝全血能分離出0.4～0.5ml血漿）;
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后，解凍時可能會出現(xiàn)絮狀渾濁，如有則需要離心去掉渾濁后
用于測定。
特別提醒：本產(chǎn)品僅供科研研究使用，不得用于人體臨床直接檢測。
產(chǎn)品名稱：單寧酶（TAN）測試盒微量法
產(chǎn)品規(guī)格：100管/48樣
檢測方法：微量法
產(chǎn)品貨號：BK-01S6458
產(chǎn)品分類：氧化與抗氧化系列
商品介紹：
測定意義: 單寧酶全稱是單寧酯酰水解酶(Tannase，EC 3.1.1.20)，它可以水解沒食子酸單寧中的酯鍵和縮酚羧鍵，生成沒食子酸和葡萄糖。 測定原理： 使用抗氧化劑沒食子酸丙酯（PG）作為單寧酶酶促反應(yīng)的底物，在270nn下測定底物PG反應(yīng)前后的光密度變化,計(jì)算單寧酶酶活力。 需自備的儀器和用品： 紫外分光光度計(jì)、水浴鍋、臺式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1 mL石英比色皿、研缽、冰、蒸餾水。 |
所需的儀器和用品：
可見分光光度計(jì)、1mL 玻璃比色皿（光徑 1cm）、低溫離心機(jī)、移液器、研缽、冰和蒸餾水
四、超氧化物歧化酶（SOD）的測定：
建議正式實(shí)驗(yàn)前選取 2 個樣本做預(yù)測定，了解本批樣品情況，熟悉實(shí)驗(yàn)流程，避免實(shí)驗(yàn)
樣本和試劑浪費(fèi)！
1、樣本制備
① 組織樣本： 取約 0.1g 組織（水分充足的樣本可取 0.25g），加入 1mL 提取液，在 4oC 或冰浴進(jìn)行 勻漿(或使用各類常見勻漿器)。4oC×12000rpm 離心 10min，取上清作為待測液。 【注】：若增加樣本量，可按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例進(jìn)行提取
| ② 細(xì)菌/細(xì)胞樣本： 先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；取約 500 萬細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提取液，超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復(fù) 30 次）； 12000rpm 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。 【注】：若增加樣本量，可按照細(xì)菌/細(xì)胞數(shù)量（10 4）：提取液（mL）為 500~1000：1 的比例進(jìn)行提取。 ③ 液體樣本：直接檢測；若渾濁，離心后取上清檢測。 |
注意事項(xiàng)：
1、試劑二為酶，不可冷凍，使用時在冰上放置。
2、對照管只需要做一管。
3、若對照管吸光值大于2，建議將試劑二用蒸餾水稀釋7倍后使用（10μl試劑二原液+60μl蒸餾水）。
4、SOD為什么有的樣本測定管大于對照管，對照管數(shù)值在什么范圍？
對照管的范圍是0.8-2。對照管吸光值過低可能是（1）試劑二或試劑四沒有現(xiàn)配現(xiàn)用；（2)沒有按順序加試劑；（3）反應(yīng)時間不夠，可以延長反應(yīng)時間（反應(yīng)時間30min可以延長到40min）。對照管吸光值過高可能是試劑二未按操作說明書稀釋相應(yīng)倍數(shù)。
若出現(xiàn)測定管大于對照管，可能是樣本中雜質(zhì)的影響太大，為了降低雜質(zhì)的影響一般將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋10倍后再測，通?？梢允箿y定正常。計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。
1g Heparin Sodium Salt 4℃避光保存
50T 副溶血性弧菌PCR檢測試劑盒 低溫運(yùn)輸，-20℃保存
100mL 一管式TMB顯色液B (沉淀型) One-Tube TMB Chromogenic Solution 2-8℃避光保存
2 ug SuperCos 1 SuperCos 1 低溫運(yùn)輸，-20℃保存
1套 硅膠膜DNA離心吸附柱（大提） Silica Spin Column Maxiprep 常溫
2 ug pAcGFP1-1 pAcGFP1-1 低溫運(yùn)輸，-20℃保存
營養(yǎng)瓊脂平板（9cm） Nutrient Agar 10個/包
1瓶 Bel-7402/FU細(xì)胞株 Bel-7402/FU 低溫運(yùn)輸和保存
Half-Fraser培養(yǎng)基顆粒 Half-Fraser Medium 225ml/袋*10
1000U p19 siRNA 結(jié)合蛋白 p19 siRNA Binding Protein -20℃保存
250mL NP40 Lysis Buffer，Low Salt（低鹽型NP40裂解液） NP40 Lysis Buffer，Low Salt 常溫保存
單寧酶（TAN）測試盒微量法PNPO 磷酸吡哆醇氧化抗體 規(guī)格: 0.2mlSLAMF9 CD2F-10抗體 規(guī)格: 0.2ml
phospho-MAP1LC3A(Ser12) 磷酸化自噬微管相關(guān)蛋白輕鏈3抗體 規(guī)格: 0.1mlGoat Anti-rabbit IgG/Bio 標(biāo)記的羊抗兔IgG 規(guī)格: 0.1ml
Retinoic acid induced 17 維甲酸誘導(dǎo)蛋白17抗體 規(guī)格: 0.2mlCYP46 24S－羥化 規(guī)格: 0.2ml
FLAG Tag(CT) FLAG Tag標(biāo)簽抗體（C端） 規(guī)格: 0.1mlphospho-ATM(Ser1981) 磷酸化毛細(xì)管擴(kuò)張性共濟(jì)失調(diào)癥突變蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml
TEM7R/Plxdc2 瘤管內(nèi)皮標(biāo)記相關(guān)蛋白質(zhì)7抗體 規(guī)格: 0.2mlPhospho-MAPKAPK2 (Thr222) 磷酸化絲裂原活化蛋白激活化的蛋白激2抗體 規(guī)格: 0.1ml
phospho-ATG3 (Tyr18) 磷酸化自噬相關(guān)蛋白3抗體 規(guī)格: 0.1mlC11orf73 11號染色體開放閱讀框73抗體 規(guī)格: 0.2ml
Phospho-TAK1(Thr187) 磷酸化轉(zhuǎn)化生因子β活化激1 規(guī)格: 0.1mlCOLEC11 凝集蛋白家族11抗體 規(guī)格: 0.2ml
Nogo-A 軸索過度生抑制因子-A抗體 規(guī)格: 0.1mlPhospho-FHIT (Tyr114) 磷酸化脆性組三聯(lián)體抗體 規(guī)格: 0.1ml
BRLF1 立即早期基因BRLF1抗體（鼻咽基因） 0.2mlPhospho-HP1 gamma (Ser93) 磷酸化染色質(zhì)相關(guān)蛋白1-γ抗體 規(guī)格: 0.1ml
TSARG4 生細(xì)胞凋亡相關(guān)基因4抗體 規(guī)格: 0.1mlDUX3 DUX3蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml
MARCH8 膜相關(guān)環(huán)指蛋白8抗體 規(guī)格: 0.2mlPKA gamma 蛋白激Aγ抗體 規(guī)格: 0.2ml
MDGA2 神經(jīng)元膜糖蛋白錨定蛋白2抗體 規(guī)格: 0.2mlKCNA5 鉀電壓閥門通道混合器相關(guān)亞家族成員5抗體 規(guī)格: 0.2ml
