本試劑盒僅供研究使用公司實(shí)驗(yàn)室提供免費(fèi)代測,7個工作日出結(jié)果,提供原始數(shù)據(jù)!
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 檢測方法 | 貨號 |
多胺氧化酶(PAO)測試盒可見分光光度法 | 50管/48樣 | 可見分光光度法 | BK-01S6473 |
商品介紹：
測定意義: 多胺氧化酶是催化生物體內(nèi)多胺氧化的關(guān)鍵酶，通過調(diào)節(jié)體內(nèi)多胺水平和生成物的濃度，參與各種植物體對逆境脅迫的反應(yīng)和生長發(fā)育過程。 測定原理： PAO催化多胺氧化產(chǎn)生過氧化氫，在過氧化氫酶存在的條件下與底物顯色，在550nm下有特征吸收峰，通過測定吸光值增加速率來反映PAO活性。 需自備的儀器和用品： 分光光度計(jì)、臺式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。 |
試劑組成和配制:
提取液：液體 100 mL×1 瓶，4℃保存。
試劑一：液體 5 mL×1 瓶，4℃避光保存。
試劑二：液體 15 mL×1 瓶，4℃保存。
試劑三：液體 3 mL×1 瓶，4℃保存。
試劑四：液體 3 mL×1 瓶，4℃保存。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果判斷我有妙招：
1、定量測定結(jié)果根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中待測物的含量。
2、以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2～3SD，作為陽性結(jié)果的閾值。
3、以P／N值(陽性孔OD值／陰性孔OD值)大于或等于2．1為陽性，P／N值小于2．1，但大于1．5為可疑，P／N小于1．5為陰性。
4、ELISA試劑盒目測定性法：加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后，肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照，與陰性對照的顏色接近者，判定為陰性。
與您分享常用不穩(wěn)定試劑的分類及要求：
① 易揮發(fā)、低燃點(diǎn)的試劑要密封，放于陰涼、通風(fēng)、遠(yuǎn)離火源處保存。
② 與水蒸氣，水發(fā)生反應(yīng)的物質(zhì)要密封，并遠(yuǎn)離水源保存。
③ 易與氧氣作用的試劑，應(yīng)將其固體或晶體密封保存，不宜長期存放其水溶液，亞硫酸，氫硫酸溶液要密封存放，鉀，鈉，白磷更要采用液封形式。
④ 與二氧化碳反應(yīng)的物質(zhì)要密封保存，其相應(yīng)的溶液較固體更易反應(yīng)，所以更要注意密封保存。
⑤ 易揮發(fā)或自身分解的試劑要密封，放于陰涼通風(fēng)處保存。
操作步驟：
1. 樣品的準(zhǔn)備：
a. 細(xì)胞樣品的準(zhǔn)備：收集細(xì)胞，用4 ℃或冰浴預(yù)冷的PBS 或生理鹽水洗滌1-2遍。沉淀用預(yù)冷組織細(xì)胞裂解液4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) 。隨后勻漿液4℃離心，取上清作為待測樣品。
b. 組織樣品的準(zhǔn)備：動物用生理鹽水(0.9% NaCl ，含有0.16mg/ml) 灌流清除血液后獲取組織樣品。按照每100mg加入500-1000ul組織細(xì)胞裂解液比例， 4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) 。隨后勻漿液4 ℃離心，取上清作為待測樣品。
d. 使用BCA蛋白濃度測定試劑盒（P1511）測定蛋白濃度。通常10-20ug蛋白的細(xì)胞或組織勻漿液樣品中SOD平均活力約1個活力單位左右(不同細(xì)胞和組織的差異會比較大，該活力范圍僅作為初步的參考) 。每種樣品準(zhǔn)備20-100 ug蛋白量通常已經(jīng)足夠用于后續(xù)檢測。
e. 根據(jù)蛋白濃度和預(yù)計(jì)的蛋白使用量，用試劑盒提供的SOD檢測緩沖液適當(dāng)稀釋樣品。例如，小鼠肝臟通常需要稀釋10-100 倍。準(zhǔn)備好的樣品如果當(dāng)天測定，可以冰浴保存；如果當(dāng)天不能完成測定，可以-70 ℃凍存，但建議盡量當(dāng)天完成測定。
2. 試劑盒的準(zhǔn)備工作：
a. WST-8酶工作液的配制： 參照下表，根據(jù)待檢測樣品(包括標(biāo)準(zhǔn)品) 數(shù)量，配制適量WST-8酶工作液，配制好的WST-8酶工作液4 ℃或冰浴保存，可當(dāng)天使用，但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。
注意：由于酶溶液的用量較少且易沉降，必須注意在使用前先輕輕離心一下，然后適當(dāng)混勻后再使用。
b. 反應(yīng)啟動工作液配制：將試劑盒提供的反應(yīng)啟動液 (40X) 溶解后混勻，按1μl 反應(yīng)啟動液(40X) 加入39μl SOD 檢測緩沖液的比例進(jìn)行稀釋，即為反應(yīng)啟動工作液。4℃或冰浴保存，可當(dāng)天使用，但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。
c. (可選做) SOD 標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)備：需自備SOD標(biāo)準(zhǔn)品，用本試劑盒提供的稀釋液將SOD標(biāo)準(zhǔn)品稀釋至如下系列濃度：20U/ml，10U/ml ，5U/ml，2.5U/ml，1.25U/ml，0.625U/ml。在隨后的檢測中可以各取20微升，參考樣品進(jìn)行檢測。說明：為避免稀釋后SOD酶活性的下降， SOD標(biāo)準(zhǔn)品宜現(xiàn)稀釋現(xiàn)使用；本試劑盒對于SOD的檢測并不需要SOD作為標(biāo)準(zhǔn)品，但可以使用SOD標(biāo)準(zhǔn)品作為陽性對照或作為對SOD活性定量的參考。
2 ug pDsRed-Nuc pDsRed-Nuc 低溫運(yùn)輸，-20℃保存
50次 真菌RNAout Fungal RNAOUT 4℃保存
25g Silver Nitrate 室溫干燥避光保存
50T 血清型耶爾森氏菌ail基因熒光PCR檢測試劑盒(探針法) 低溫運(yùn)輸，-20℃保存
200 mL 人胰島細(xì)胞分離液1.056 Cell Separation Solution -20℃保存
100mL HEPES Buffer,0.5M,pH7.4 HEPES Buffer,0.5M,pH7.4 常溫保存
1mL 綠如藍(lán)染料，PCR級 DNAGREEN, PCR Grade -20℃保存
2 ug pLenti6/UbC/V5-DEST pLenti6/UbC/V5-DEST 低溫運(yùn)輸，-20℃保存
固氮根瘤菌培養(yǎng)基 Nitrogen-fixing Rhizobium medium 250g
1瓶 MG-63細(xì)胞株 MG-63 低溫運(yùn)輸和保存
瓊脂培養(yǎng)基O Agar medium O(Baird-Parker agar) 250g
多胺氧化酶(PAO)測試盒可見分光光度法BIN3 細(xì)胞骨架銜接蛋白BIN3抗體 規(guī)格: 0.2mlFbxW2 FbxW2蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml
sLOX 1 可溶性凝集素樣氧化脂蛋白受體1抗體 規(guī)格: 0.2mlTORC1/CRTC1 環(huán)苷酸應(yīng)答元件結(jié)合蛋白轉(zhuǎn)錄共激活因子TORC1抗體 規(guī)格: 0.2ml
Goat Anti-Mouse IgM/Bio 標(biāo)記的羊抗小鼠IgM 規(guī)格: 0.1ml
Plakophilin 2 橋粒斑菲素蛋白2抗體 規(guī)格: 0.2ml
MAP1A 微管相關(guān)蛋白1A抗體 規(guī)格: 0.1ml
C17orf77 17號染色體開放閱讀框77抗體 規(guī)格: 0.2ml
DIAPH1 耳聾常染色體顯性遺傳相關(guān)蛋白1抗體 規(guī)格: 0.2ml
Mouse Anti-Goat IgG/Cy7 Cy7標(biāo)記的小鼠抗羊IgG 規(guī)格: 0.1ml
PADI4 關(guān)節(jié)相關(guān)基因抗體 規(guī)格: 0.2ml
ETBR/Endothelin B Receptor 內(nèi)皮素B受體抗體 規(guī)格: 0.2ml
Goat Anti-Mouse IgG/AP 堿性磷酸（AP）標(biāo)記的羊抗小鼠IgG 規(guī)格: 0.1ml
PCDHA1 原鈣粘附蛋白α1抗體 規(guī)格: 0.2ml
