大鼠糖原合成酶激酶3（GSK-3）ELISA試劑盒使用說明書

【資料簡介】

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來自：上海勁馬實驗設備有限公司

(用于血清、血漿、細胞培養(yǎng)上清液和其它生物體液內)

原理

本實驗采用雙抗體夾心ABC-ELISA法。用抗大鼠GSK-3單抗包被于酶標板上，標準品和樣品中的GSK-3與單抗結合，加入生物素化的抗大鼠 GSK-3，形成免疫復合物連接在板上，辣根過氧化物酶標記的Streptavidin與生物素結合，加入底物工作液顯藍色，zui后加終止液硫酸，在 450nm處測OD值，GSK-3濃度與OD值成正比，可通過繪制標準曲線求出標本中GSK-3濃度。

試劑盒組成（2-8℃保存）

酶標板（Coated Wells）	96孔	酶標抗體工作液（Enzyme Conjugate）	12ml
10×標本稀釋液（Sample Buffer）	12ml	20×濃縮洗滌液（Wash Buffer）	50ml
標準品（Standards）：10ng/瓶	2瓶	底物工作液（TMB Solution）	12ml
*抗體工作液（Biotinylated Antibody）	12ml	終止液（Stop Solution）	12ml

準備試劑與收集血樣

1.  收集標本：血清、血漿（EDTA、檸檬酸鹽、肝素抗凝）、細胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿等盡早檢測，2-8℃保存48小時；更長時間須冷凍（-20℃或 -70℃）保存，避免反復凍融。正常標本測定前用標本稀釋液至少作1：20稀釋（取10ul，加標本稀釋液190ul,稀釋20倍）。

2. 標準品液配制：使用前加入0. 5ml蒸餾水混勻，配成20ng/ml的溶液。設標準管8管，*管加標本稀釋液900ul，第二至第八管加入標本稀釋液500ul。在*管中加入 20ng/ml的標準品溶液100ul混勻后用加樣器吸出500ul，移至第二管。如此反復作對倍稀釋，從第七管中吸出500ul棄去。第八管為空白對 照。

3. 10×標本稀釋液用蒸餾水作1:10倍稀釋（示例：1ml濃稀釋液+9ml蒸餾水）。

4. 洗滌液：用重蒸水1:20稀釋（示例：1ml濃縮洗滌液加入19ml的重蒸水）

檢測程序

1. 加樣：每孔各加入標準品或待測樣品100ul，將反應板充分混勻后置37℃120分鐘。

2. 洗板：用洗滌液將反應板充分洗滌4-6次，向濾紙上印干。

3. 每孔中加入*抗體工作液100ul。將反應板充分混勻后置37℃60分鐘。

4. 洗板：同前。

5. 每孔加酶標抗體工作液100ul。將反應板置37℃30分鐘。

6. 洗板：同前。

7. 每孔加入底物工作液100ul，置37℃暗處反應15分鐘。

8. 每孔加入100ul終止液混勻。

9. 30分鐘內用酶標儀在450nm處測吸光值。

結果計算與判斷

1. 所有OD值都應減除空白值后再行計算。

2. 以標準品2000、1000、500、250、125、62. 5、31. 2、0pg/ml為橫坐標，OD值為縱坐標，在坐標紙上作圖，畫出標準曲線。

3. 根據樣品OD值在該曲線圖上查出相應GSK-3含量，再乘上稀釋倍數即可。

試劑盒性能

1. 靈敏度：zui小的GSK-3檢測濃度小于15pg/ml。

2. 特異性：可同時檢測重組或天然的大鼠GSK-3。不與大鼠其它細胞因子有交叉反應。

3. 重復性：板內、板見變異系數均小于10％。

注意事項

1. 以上標準孔及待測樣品均建議做復孔，每次測定應同時做標準曲線。

2. 洗滌過程很關鍵。洗滌不充分將導致度誤差及OD值錯誤地升高。

3. 板條開封后剩余板條要再封好，保持板條干燥。

4. 本試劑盒宜置4oC冰箱保存。

5. 本試劑盒僅用于科研，不能用于臨床診斷！