喹乙醇（olaquindox）快速檢測試劑盒說明書

【資料簡介】

 一、 原理 

本試劑盒采用間接競爭ELISA方法檢測等樣本中的喹乙醇，在微孔條上預(yù)包被上偶聯(lián)抗原，利用抗原與抗體的特異性免疫化學(xué)反應(yīng)的原理來進行的，樣本中的喹乙醇和微孔條上預(yù)包被偶聯(lián)抗原競爭抗喹乙醇抗體，加入酶標記物后，用TMB底物顯色，樣品中的喹乙醇含量與樣品的吸光度值呈反比，與標準曲線比較即可得出喹乙醇含量。

二、 試劑盒技術(shù)指標：

試劑盒靈敏度：  1ppb

樣本檢測下限：

組    織—————————————1ppb

飼    料————————————100ppb

交叉反應(yīng)率：

喹乙醇 ———————————————  100%

卡巴多 ——————————————  ﹤7%

回收率：

組   織————————————80%±10%

飼   料————————————80%±15%

三、試劑盒組成

1、    微量測試孔：每條8孔，一板12條

2、    標準溶液X6瓶：（1ml/瓶）0ppb、1ppb、3ppb、9ppb、27ppb、81ppb

3、    酶標記物  12ml  ………………紅色帽

4、    抗體工作液 7ml  ……………… 藍色帽

5、    底物A液   7 ml…………………白色帽

6、    底物B液   7 ml…………………黑色帽

7、    終止液     7 ml…………………黃色帽

8、    20X濃縮洗滌液40 ml……………白色帽

9、    2X濃縮復(fù)溶液  50 ml……………透明帽

四、 所用儀器、試劑

具備的儀器：微孔酶標儀、氮氣吹干裝置、打印機、均質(zhì)器 、振蕩器、離心機、恒溫箱、天平（感量0.01g）、刻度移液管

微量移液器：單道20µl-200µl、100µl-1000µl、多道250µl

試     劑：乙腈、正己烷

五、樣本前處理步驟

樣本處理前須知

處理任何樣本時，都必須注意：

（a）實驗中必須使用一次性吸頭，在吸取不同的試劑時要更換吸頭。

（b）實驗之前須檢查各種實驗器具是否干凈，必要時可對實驗器具進行清潔，以避免污染干擾實驗結(jié)果。

 

（a）組織（豬肝、豬肉、魚、蝦等）樣本的處理方法

1、    稱2±0.05g組織，加入10ml無水乙腈，振蕩5min,室溫4000r/min以上離心10min。

2、    取上清液5ml于50℃氮氣或空氣下吹干。

3、    用2ml正己烷溶解干燥物，用1ml已稀釋

好的復(fù)溶液（2X濃縮復(fù)溶液與去離子水1:1

稀釋）充分混合30s；4000r/min以上

離心5min。

4、    取50µl進行分析。

樣本稀釋倍數(shù)：1

 

（b）飼料樣品的處理方法

1、    將飼料樣品研碎，稱1.0±0.05g研碎的飼料

樣品，加入2g Al₂O₃ ，然后加入5ml乙腈，

劇烈震蕩2min，室溫避光靜置8min，取出

上清液50ul與已稀釋好的復(fù)溶液950ul （2X

濃縮復(fù)溶液與去離子水1:1稀釋），混勻，

25℃，4000r/min,；離心5min。

2、    取50ul上清進行分析。

樣本稀釋倍數(shù):100

六、酶標免疫分析程序

1、    將所需試劑從冷藏環(huán)境中取出，置室溫（20-25℃）平衡30min以上, 注意每種液體試劑使用前均須搖勻。

2、    按需要取出微孔條及板架，將不用的微孔放入自封袋，保存于2-8℃。

3、    配液：將40ml濃縮洗滌液（20倍濃縮）用去離子水按照1：19稀釋（1份濃縮洗滌液+19份去離子水），或按所需用量配制洗滌液。

4、    編號：將樣本和標準品對應(yīng)微孔按序編號，每個樣品和標準品做2孔平行，并記錄標準孔和樣本孔所在的位置。

5、    加標準品/樣本50µl/孔到各自的微孔中，再加入50µl/孔的抗體工作液，用蓋板膜蓋板，輕輕振蕩混勻，37℃環(huán)境反應(yīng)30min 。

6、    取出微孔板，甩出孔內(nèi)液體，用洗滌液按250μl /孔洗板4-5次，每次浸泡15-30秒，用吸水紙拍干.

7、    酶標記物：加入酶標記物100µl/孔，用蓋板膜封板，37℃環(huán)境中反應(yīng)30min。取出酶標板，如前述洗板5次。

8、    顯色：每孔先加入底物液A液50µl，再加B液50µl，輕輕振蕩混勻，37℃環(huán)境中避光顯色15min。

9、    測定：每孔加入終止液50µl，輕輕振蕩混勻，設(shè)定酶標儀于450nm處（建議用雙波長450/630nm檢測，在5min內(nèi)讀完數(shù)據(jù)），測定吸光度值（OD值）。

七、結(jié)果判定

結(jié)果判定有兩種方法，粗略判定可用第1種方法，定量判定用第2種方法。注意樣本吸光值與其所含喹乙醇的含量成負相關(guān)。

1、    粗略判定：

用樣品的平均吸光度值與標準值比較即可得出樣本所含喹乙醇濃度范圍（ng/ml）。假設(shè)樣品1的吸光度值為0.313，樣品2的吸光度值為1.032，標準液吸光度值分別是：0ppb為1.892；1ppb為1.501；3ppb為1.175； 9ppb為0.751； 27ppb為0.421； 81ppb為0.198。則樣品1的濃度范圍是27ppb-81ppb；樣品2的濃度范圍是3ppb-9ppb。乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中喹乙醇實際濃度。

2、  定量分析：

所獲得的每個濃度標準溶液和樣本吸光度值的平均值（B）除以*個標準（0標準）的吸光度值（B₀）再乘以100%，即百分吸光度值。

百分吸光度值（%）＝	B	×100%
	B0

B—標準溶液或樣本溶液的平均吸光度值

B₀—0ng/ml標準溶液的平均吸光度值

以標準品百分吸光率為縱坐標，以喹乙醇標準品濃度（ng/ml）的半對數(shù)為橫坐標，繪制標準曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標準曲線中，從標準曲線上讀出樣本所對應(yīng)的濃度，乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中喹乙醇實際濃度。

若利用試劑盒專業(yè)分析軟件進行計算，更便于大量樣品的準確、快速分析。

八、注意事項

1、    用前將所有試劑溫度回升至室溫20-25℃。

2、    用之后立即將所有試劑放回2-8℃冰箱。

3、    在ELISA分析中的再現(xiàn)性，很大程度上取決于洗板的一致性，仔細按照推薦的洗板順序操作是ELISA測定程序中的要點。

4、    所有恒溫孵育過程中，避免光線照射，用蓋板膜封住微孔板。