大鼠γ氨基丁酸（GABA）說明書

【資料簡介】

試劑盒使用說明書
本試劑盒僅供研究使用。
檢測范圍：                                                                                                                    96T 
0.5µmol/ L  -24µmol/ L
 
使用目的：
本試劑盒用于測定大鼠血清、血漿及相關(guān)液體樣本中γ氨基丁酸（GABA） 含量。
大鼠γ氨基丁酸（GABA）實驗原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中大鼠γ氨基丁酸（GABA） 水平。用純化的大鼠γ
氨基丁酸（GABA） 抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入γ氨基丁
酸（GABA） ，再與 HRP 標(biāo)記的γ氨基丁酸（GABA） 抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合
物，經(jīng)過*洗滌后加底物 TMB顯色。TMB在HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作
用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的γ氨基丁酸（GABA） 呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在
450nm 波長下測定吸光度（OD值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中大鼠γ氨基丁酸（GABA） 濃度。  
大鼠γ氨基丁酸（GABA）試劑盒組成  
1  30倍濃縮洗滌液  20ml×1 瓶  7  終止液  6ml×1 瓶
2  酶標(biāo)試劑  6ml×1 瓶  8  標(biāo)準(zhǔn)品（48µmol/ L）  0.5ml×1 瓶
3  酶標(biāo)包被板  12孔×8 條  9  標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液  1.5 ml×1 瓶
4  樣品稀釋液  6ml×1 瓶  10  說明書  1 份
5  顯色劑 A 液  6ml×1 瓶  11   封板膜  2 張    
6  顯色劑 B 液  6ml×1/ 瓶  12  密封袋  1 個
大鼠γ氨基丁酸（GABA）標(biāo)本要求  
1．標(biāo)本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能
馬上進行試驗，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2．不能檢測含 NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP ）活性。
操作步驟
1.   標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀
釋。
24µmol/ L  5 號標(biāo)準(zhǔn)品  150µl 的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入 150µl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
12µmol/ L  4 號標(biāo)準(zhǔn)品  150µl 的5 號標(biāo)準(zhǔn)品加入 150µl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
6µmol/ L  3 號標(biāo)準(zhǔn)品  150µl 的4 號標(biāo)準(zhǔn)品加入 150µl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
3µmol/ L  2 號標(biāo)準(zhǔn)品  150µl 的3 號標(biāo)準(zhǔn)品加入 150µl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
1.5µmol/ L  1 號標(biāo)準(zhǔn)品  150µl 的2 號標(biāo)準(zhǔn)品加入 150µl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
 
 
2.   加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)孔、
待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣 50µl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40µl，
然后再加待測樣品 10 µl（樣品zui終稀釋度為 5 倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡
量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
3.   溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。      
4.   配液：將30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用
5.   洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此
重復(fù)5 次，拍干。
6.   加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑 50µl，空白孔除外。  
7.   溫育：操作同 3。
8.   洗滌：操作同 5。
9.   顯色：每孔先加入顯色劑 A50µl，再加入顯色劑 B50µl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色
15分鐘.
10.  終止：每孔加終止液50µl，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。
11.  測定：以空白空調(diào)零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。  測定應(yīng)在加終止
液后15 分鐘以內(nèi)進行。