人基質(zhì)細胞衍生因子1β（SDF-1βCXCL12）說明書

【資料簡介】

人基質(zhì)細胞衍生因子1β（SDF-1βCXCL12）實驗原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中人基質(zhì)細胞衍生因子1 β（SDF-1 β/CXCL12）水
平。用純化的人基質(zhì)細胞衍生因子 1β（SDF-1β/CXCL12）抗體包被微孔板，制成固相抗體，
往包被單抗的微孔中依次加入基質(zhì)細胞衍生因子 1β（SDF-1β/CXCL12），再與 HRP 標(biāo)記的
基質(zhì)細胞衍生因子 1β（SDF-1β/CXCL12）抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過
*洗滌后加底物 TMB顯色。TMB在HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化
成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的基質(zhì)細胞衍生因子 1β（SDF-1β/CXCL12）呈正相關(guān)。
用酶標(biāo)儀在 450nm 波長下測定吸光度（OD值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中人基質(zhì)細胞衍生
因子1β（SDF-1β/CXCL12）濃度。 

人基質(zhì)細胞衍生因子1β（SDF-1βCXCL12）標(biāo)本要求  
1．標(biāo)本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能
馬上進行試驗，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2．不能檢測含 NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP ）活性。
人基質(zhì)細胞衍生因子1β（SDF-1βCXCL12）操作步驟
1.   標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀
釋。
4000pg/ml  5 號標(biāo)準(zhǔn)品  150µl 的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入 150µl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
2000pg/ml  4 號標(biāo)準(zhǔn)品  150µl 的5 號標(biāo)準(zhǔn)品加入 150µl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
1000pg/ml  3 號標(biāo)準(zhǔn)品  150µl 的4 號標(biāo)準(zhǔn)品加入 150µl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
500pg/ml  2 號標(biāo)準(zhǔn)品  150µl 的3 號標(biāo)準(zhǔn)品加入 150µl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
250pg/ml  1 號標(biāo)準(zhǔn)品  150µl 的2 號標(biāo)準(zhǔn)品加入 150µl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
 
 
2.   加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)孔、
待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣 50µl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40µl，
然后再加待測樣品 10 µl（樣品zui終稀釋度為 5 倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡
量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
3.   溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。      
4.   配液：將30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用
5.   洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此
重復(fù)5 次，拍干。
6.   加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑 50µl，空白孔除外。  
7.   溫育：操作同 3。
8.   洗滌：操作同 5。
9.   顯色：每孔先加入顯色劑 A50µl，再加入顯色劑 B50µl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色
15分鐘.
10.  終止：每孔加終止液50µl，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。
11.  測定：以空白空調(diào)零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。  測定應(yīng)在加終止
液后15 分鐘以內(nèi)進行。