48T大鼠過氧化物酶體增殖物激活受體γ輔激活子1α

【資料簡介】

大鼠過氧化物酶體增殖物激活受體γ輔激活子1αELISA 檢測(cè)試劑盒

本試劑僅供研究使用  標(biāo)本：血清或血漿

試驗(yàn)原理：
PGC-1α試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）.已知PGC-1α濃度的標(biāo)準(zhǔn)品、未知濃度的樣品加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)。先將PGC-1α和生物素標(biāo)記的抗體同時(shí)溫育。洗滌后，加入親和素標(biāo)記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌，去除未結(jié)合的酶結(jié)合物，然后加入底物A、B，和酶結(jié)合物同時(shí)作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中PGC-1α的濃度呈比例關(guān)系。

試劑盒內(nèi)容及其配制：
試劑盒成份 96孔配置 48孔配置
96/48人份酶標(biāo)板 1塊板（96T） 半塊（48T）
塑料膜板蓋 1塊 半塊
標(biāo)準(zhǔn)品：800nmol/L 1瓶（1.0ml） 1瓶（0.5ml）
空白對(duì)照 1瓶（1.0ml） 1瓶（0.5ml）
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋緩沖液 1瓶（8.0ml） 1瓶（4.0ml）
生物素標(biāo)記的抗PGC-1α抗體 1瓶（8.0ml） 1瓶（4.0ml）
親和鏈酶素-HRP 1瓶（12ml） 1瓶（6.0ml）
洗滌緩沖液 1瓶（20ml） 1瓶（10ml）
底物A 1瓶（6.0ml） 1瓶（3.0ml）
底物B 1瓶（6.0ml） 1瓶（3.0ml）
終止液 1瓶（6.0ml） 1瓶（3.0ml）

大鼠過氧化物酶體增殖物激活受體γ輔激活子1αELISA 檢測(cè)試劑盒
自備材料：
1． 蒸餾水。
2． 加樣器：5ul、10ul、50ul、100ul、200、500ul、1000ul。
3． 振蕩器及磁力攪拌器等。
4． 
樣品收集、處理及保存方法：

1、 血清-----操作過程中避免任何細(xì)胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。  
2、 血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測(cè)。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
3、 細(xì)胞上清液---1000×g離心10分鐘除顆粒和聚合物。
4、 組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘，取上清液
5、 保存------如果樣品不立即使用，應(yīng)將其分成小部分-70 ℃保存，避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒，檢測(cè)前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

操作注意事項(xiàng)：

? 試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲(chǔ)存，使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄，不可保存。
? 實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。
? 不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
? 使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時(shí)，避免使用帶金屬部分的加樣器。
? 使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
? 底物A應(yīng)揮發(fā)，避免長時(shí)間打開蓋子。底物B對(duì)光敏感，避免長時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
? 加入試劑的順序應(yīng)一致，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。
? 按照說明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。

大鼠過氧化物酶體增殖物激活受體γ輔激活子1αELISA 檢測(cè)試劑盒
安全性：

1． 避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體，請(qǐng)盡快用水沖洗。
2． 實(shí)驗(yàn)中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。
3． 不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。

試劑的準(zhǔn)備：

1． 標(biāo)準(zhǔn)品：標(biāo)準(zhǔn)品的系列稀釋應(yīng)在實(shí)驗(yàn)時(shí)準(zhǔn)備，不能儲(chǔ)存。稀釋前將標(biāo)準(zhǔn)品振蕩混勻。稀釋比例按下表中進(jìn)行：
800
 nmol/L （6號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品） 原倍濃度不用稀釋直接加入50ul。
400
nmol/L （5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品） 100ul的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
200
nmol/L （4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品） 100ul的5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
100
nmol/L （3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品） 100ul的4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
50
nmol/L （2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品） 100ul的3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
25 nmol/L （1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品） 100ul的2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
0 nmol/L （空白對(duì)照） 原始濃度不用稀釋直接加入50ul。

2． 洗滌緩沖液（50×）的稀釋：蒸餾水50倍稀釋。

大鼠過氧化物酶體增殖物激活受體γ輔激活子1αELISA 檢測(cè)試劑盒
試劑盒性能：

1. 靈敏度：zui小的檢測(cè)濃度小于1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990。
2. 特異性：不與其它細(xì)胞因子反應(yīng)。
3. 重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。

  
操作步驟：

1． 使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫，以免加樣時(shí)加入大量的氣泡，產(chǎn)生加樣上的誤差。
2． 根據(jù)待測(cè)樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個(gè)樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。
3． 加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔、加入待測(cè)樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul的生物素標(biāo)記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育45分鐘。
4． 甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作4次。如果用洗板機(jī)洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。
5． 每孔加入100ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。
6． 甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作4次。如果用洗板機(jī)洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。
7． 每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育5分鐘。避免光照。
8． 取出酶標(biāo)板，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應(yīng)立即測(cè)定結(jié)果。
9． 在450nm波長處測(cè)定各孔的OD值。

大鼠過氧化物酶體增殖物激活受體γ輔激活子1αELISA 檢測(cè)試劑盒
結(jié) 果 判 斷 與 分 析：

1、儀器值：于波長450nm的酶標(biāo)儀上讀取各孔的OD值
2、以吸光度OD值為縱坐標(biāo)（Y），相應(yīng)的PGC-1α標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)（X），做得相應(yīng)的曲線，樣品的PGC-1α含量可根據(jù)其OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線換算出相應(yīng)的濃度, 再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計(jì)算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實(shí)際濃度。
3、檢測(cè)值范圍：0-800nmol/L
4、敏感度： 1.0 nmol/L

3,3’-Dimethoxybenzidine, dihydrochloride 3,3 -二甲氧基聯(lián)苯胺鹽酸鹽 [20325-40-0] 100g
Flunixin meglumine 氟尼辛葡甲胺 [42461-84-7] 100g
9-Fluorenone-4-carboxylic acid 9-芴酮-4-甲酸 [6223-83-2] 25g
Fluorescein, free acid 熒光素 [2321-07-5] 100g
DTAC 十二烷基 -*基氯化銨 [112-00-5] 250g
3,5-Dimethoxybenzoic acid 3,5-二甲氧基苯甲酸 [1132-21-4] 250g
2,7-Dimethoxynaphthalene 2,7-二甲氧基萘 [3469-26-9] 100g
N,N-Dimethylacetamide N’,N-二甲基乙酰胺 [127-19-5] 250ml
6-Dimethylallylaminopurine 6-（異戊烯基氨基）嘌呤 [2365-40-4] 1g
6-Dimethylallylamino purine riboside （2iP Riboside） 6-（γ,γ-二甲基烯丙基氨基）嘌呤核苷 [7724-76-7] 100mg
Dimethylamine hydrochloride 二甲胺鹽酸鹽 [506-59-2] 500g
4-（Dimethylamino）-benzaldehyde 4-（二甲氨基）苯甲醛 [100-10-7] 100g
5-（p-Dimethylaminobenzal） rhodanine 玫瑰紅銀試劑 [536-17-4] 25g
2-（Dimethylamino）ethyl methacrylate 甲基丙烯酸二甲氨乙酯 [2867-47-2] 100g
3-（Dimethylamino）phenol 3-羥基-N,N-二甲基苯胺 [99-07-0 ] 100g
4-Dimethylaminopyridine 對(duì)二甲氨基吡啶 [1122-58-3] 250g
2,4-Dimethylaniline 2,4-二甲基苯胺 [95-68-1] 250ml
2,6-Dimethylaniline 2,6-二甲基苯胺 [87-62-7] 250ml
DATC 50% Solution 十二烷基-*基-氯化銨50% / 500ml
DNase II, Pocine Pancreas 脫氧核糖核酸酶II [9025-64-3] 80KU