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DNA的轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)原理:
體外通過(guò)基因工程手段所構(gòu)建的含目的基因的重組質(zhì)粒,選用轉(zhuǎn)化和篩選技術(shù),可獲得含重組的陽(yáng)性克隆.在此陽(yáng)性克隆中,DNA可在生物體系中大量擴(kuò)增,繁殖,保存以及表達(dá)目的基因的產(chǎn)物,這是PCR體外擴(kuò)增DNA所不能替代的.配合DNA重組技術(shù),所獲得的,不同目的需要的陽(yáng)性菌株已廣泛應(yīng)用于科研,醫(yī)藥生產(chǎn)和生物發(fā)酵等領(lǐng)域.
質(zhì)粒轉(zhuǎn)化不同細(xì)菌有不同的轉(zhuǎn)化效率,轉(zhuǎn)化效率的高低與實(shí)驗(yàn)的成敗直接相關(guān), 通常轉(zhuǎn)化效率可達(dá)105-107轉(zhuǎn)化子/μg DNA.獲得高轉(zhuǎn)化效率的關(guān)鍵是感受態(tài)體菌的制備.感受態(tài)就是細(xì)菌吸收轉(zhuǎn)化因子的生理狀態(tài),只有發(fā)展為感受態(tài)的細(xì)胞才能穩(wěn)定攝取外來(lái)的DNA分子. pUC18的LacZ基因區(qū)域當(dāng)有DNA片段插入時(shí),LacZ基因失活,轉(zhuǎn)化進(jìn)入大腸桿菌并在含有IPTG和X-gal培養(yǎng)基生長(zhǎng)時(shí),會(huì)產(chǎn)生白色的克隆,不含插入片段的pUC18質(zhì)粒進(jìn)入宿主細(xì)胞生成藍(lán)色菌落.
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