實(shí)驗(yàn)原理
        堿裂解法提取質(zhì)粒是根據(jù)共價(jià)閉合環(huán)狀質(zhì)粒DNA與線性染色體DNA在拓?fù)鋵W(xué)上的差異來(lái)分離它們。在pH值介于12.0~12.5這個(gè)狹窄的范圍內(nèi),線性的DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)解開(kāi)而被變性,盡管在這樣的條件下,共價(jià)閉環(huán)質(zhì)粒DNA的氫鍵會(huì)被斷裂,但兩條互補(bǔ)鏈彼此相互盤(pán)繞,仍會(huì)緊密地結(jié)合在一起。當(dāng)加入pH4.8的乙酸鉀高鹽緩沖液恢復(fù)Ph至中性時(shí)，共價(jià)閉合環(huán)狀質(zhì)粒DNA的兩條互補(bǔ)鏈仍保持在一起，因此復(fù)性迅速而準(zhǔn)確，在而線性的染色體DNA的兩條互補(bǔ)鏈彼此已*分開(kāi)，復(fù)性就不會(huì)那么迅速而準(zhǔn)確，它們纏繞形成網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，通過(guò)離心，染色體DNA與不穩(wěn)定的大分子RNA、蛋白質(zhì)-SDS復(fù)合物等一起沉淀下來(lái)而被除去。
實(shí)驗(yàn)材料
1.葡萄糖 2.三羥甲基氨基甲烷（Tris）
3.乙二胺四乙酸（EDTA） 4.氫氧化鈉
5.十二烷基硫酸鈉（SDS） 6.乙酸鉀
7.冰乙酸 8.氯仿
9.乙醇 10.胰RNA酶
11.氨芐* 12.蔗糖
13.溴酚藍(lán) 14.酚
15.β巰基乙醇 16.鹽酸
17.含pUC18質(zhì)粒的大腸桿菌
實(shí)驗(yàn)步驟
提取質(zhì)粒
1．將2ml含相應(yīng)抗生素的LB液體培養(yǎng)基加入到試管中，接入含質(zhì)粒的大腸桿菌，37℃振蕩培養(yǎng)過(guò)夜。
2．取1.5ml培養(yǎng)物倒入微量離心管中，4000rpm，離心2min。
3．吸去培養(yǎng)液，使細(xì)胞沉淀盡可能干燥。
4．將細(xì)菌沉淀懸浮于100μl溶液Ⅰ中，充分混勻，室溫放置10 min。
5．加200μl溶液Ⅱ（新鮮配制），混勻內(nèi)容物，將離心管放冰上5 min。
6．加入150μl溶液Ⅲ（冰上預(yù)冷），蓋緊管口，顛倒數(shù)次使混勻。
7．1200rpm，離心15 min，將上清轉(zhuǎn)至另一離心管中。
8．向上清中加入等體積酚：氯仿（去蛋白），反復(fù)混勻，12000rpm，離心5min,將上清轉(zhuǎn)移到另一離心管中.
9.向上清加入2倍體積乙醇,混勻后,室溫放置5-10min。12000rpm離心5min。倒去上清液，把離心管倒扣在吸水紙上，吸干液體。
10．用1ml70%乙醇洗滌質(zhì)粒DNA沉淀，振蕩并離心，倒去上清液，真空抽干或空氣中干燥。
11．加50μl TE緩沖液，其中含有20μg/ml的胰RNA酶，使DNA*溶解，-20℃保存。