犬瘟熱病毒抗體elisa分析試劑盒使用說明書

使用目的：

本試劑盒用于測定犬血清、血漿及相關液體樣本中瘟熱病毒抗體（CDV Ab）表達。

實驗原理

本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中犬瘟熱病毒抗體（CDV Ab）表達。用純化的抗原包被微孔板，制成固相抗原，可與樣品中瘟熱病毒抗體（CDV Ab）相結合，經(jīng)洗滌除去未結合的抗原和其他成分后再與HRP 標記的抗原結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB 顯色。TMB 在HRP 酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），與CUTOFF 值相比較，從而判定標本中犬瘟熱病毒抗體（CDV Ab）的存在與否。

試劑盒組成：

30 倍濃縮洗滌液 20ml× 瓶 7 終止液 6ml× 瓶

2 酶標試劑 6ml× 瓶 8 陽性對照 0.5ml× 瓶

3 酶標包被板 2 孔×8 條 9 陰性對照 0.5ml× 瓶

4 樣品稀釋液 6ml× 瓶 0 說明書 份

5 顯色劑A 液 6ml× 瓶 封板膜 2 張

6 顯色劑B 液 6ml×/瓶 2 密封袋 個

標本要求

．標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融

2．不能檢測含NaN3 的樣品，因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

試劑盒操作步驟

. 編號：將樣品對應微孔按序編號，每板應設陰性對照2 孔、陽性對照2 孔、空白對照孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）

2. 加樣：分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照50μl。然后在待測樣品孔先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品0μl。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，

3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。

4. 配液：將30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水30 倍稀釋后備用

5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30 秒后棄去，如此重復5 次，拍干。

6. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。

7. 溫育：操作同3。

8. 洗滌：操作同5。

9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色5 分鐘.

0. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。

. 測定：以空白空調(diào)零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。 測定應在加終止液后5 分鐘以內(nèi)進行。

試劑盒操作程序總結：

計算和結果判定：

試驗有效性：陽性對照孔平均值≥.00; 陰性對照平均值≤0.0

臨界值（CUT OFF）計算：臨界值=陰性對照孔平均值+0.5

陰性判定：樣品OD 值< 臨界值（CUT OFF）者為瘟熱病毒抗體（CDV Ab）陰性

陽性判定：樣品OD 值≥ 臨界值（CUT OFF）者為瘟熱病毒抗體（CDV Ab）陽性

注意事項

．操作嚴格按照說明書進行，本試劑不同批號組分不得混用。

2．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡5-30 分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。

3．濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。

4．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

5．底物請避光保存。

6．試驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準，使用雙波長檢測時，參考波長為630nm

7．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。終止液為2M 的硫酸，使用時必須

注意安全。

保存條件及有效期

．試劑盒保存：；2-8℃。

2．有效期：6 個月