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葡聚糖凝膠是一種具有三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的高分子化合物,它是由葡聚糖加入交聯(lián)劑環(huán)氧氯丙烷通過醚鍵互相交聯(lián)聚合而成的,交聯(lián)度越大,網(wǎng)孔結(jié)構(gòu)就越緊密,吸水后的體積膨脹就越小,能允許進(jìn)入凝膠內(nèi)部的分子的分子量也就越小,反之亦然.層 析時,大于凝膠孔徑的大分子,被阻于凝膠相外,沿著凝膠顆粒之間的間隙走,下移速度zui快,故zui先洗脫下來,中分子物質(zhì)部份進(jìn)入凝膠內(nèi)部,洗脫速度為其次,而小分子物質(zhì)因全部進(jìn)入凝膠,受到阻力zui大,故zui后被洗脫下來,如此物質(zhì)得到分離.型號G表明每克于凝膠吸水量的多少,例G-25表明每克干凝脫膠吸水2.5毫升.這表征了凝膠所能膨脹的倍數(shù),亦間接表征了凝膠孔徑的大小.

凝膠目數(shù)表明顆粒的大小,目數(shù)值越大,顆粒愈細(xì),分離效果愈好,但粒子太細(xì)將影響流速,造成洗脫時間過長,易造成生物制品的變質(zhì).反之,粒子太粗則洗脫過快,峰型不集中,分離效果不佳.

裝柱前,凝膠須充分膨脹,若在柱中尚繼續(xù)膨脹,會造成凝膠擠壓變形,堵塞通道,失去分離性能.對于G-75上的軟膠,尤其要注意.軟膠還須十分注意不要超工作壓力運(yùn)作,因為軟膠的鋼性較小,容易擠壓變形,導(dǎo)至柱子堵塞,此外,長期使用常會引入一些不溶解雜質(zhì)或因壓得較緊而流速漸減,故必要時應(yīng)洗膠并重新裝柱.

國產(chǎn)凝膠的粒度分級往往不是很*,凝膠經(jīng)膨脹后裝柱前,應(yīng)傾去在水中難已沉淀的極細(xì)微粒,免使影響流速.

Sephadex G型主要物理性質(zhì)           zui低膨脹時間

型號 吸水量ml/g  床體積ml/g  分離范圍 [肽類和球蛋白]  zui大工作壓力[cm水壓]  [沸水浴]

G-10      1         2~3              70               >100              1小時

G-15      1.5        2.5~3.5          1500              >100              1小時

G-25      2.5        4~6             1000-5000         >100              1小時

G-50      5.0        9-11             1500-30000        >100              2小時

G-75       7.5       12-15            3000-70000        50               3小時

G-100      10.0       15-20           4000-150000        35               5小時

G-150      15.0        20~30           5000-400000        15               5小時

G-200      20.0        30~40           5000-800000       10            5小時