一.原理
RNA提取技術(shù)不僅是分子生物學技術(shù)的重要組成部分,也是功能基因組學科研技術(shù)的重要基礎(chǔ)。從RNA水平研究生物體內(nèi)基因的調(diào)控機制,已成為分子生物學研究的一個重要手段。對某一生物或組織進行性狀研究,首先要獲得該性狀基因,從組織細胞中分離完整的RNA對于分子克隆和基因表達分析等實驗是至關(guān)重要的,如Northern印跡及雜交分析、cDNA合成等實驗的成效在很大程度上取決于RNA的質(zhì)量。利用提取的RNA人們可以對特定的基因表達進行定量的檢測,從分子水平的了解細胞生命活動的規(guī)律。通常一個典型的哺乳動物細胞約含有10-5μgRNA ,其中80%~85%為rRNA(主要是28S、18 S和5.8 S、5S四種類型);10%~15%為tRNA和核內(nèi)小分子RNA。
這些高峰度的RNA的大小和序列確定,可通過凝膠電泳、密度梯度離心、陰離子交換層析和高壓液相層析(HPLC)分離。相反,占RNA總量1%~5%的為mRNA 。mRNA 雖然大小和核苷酸序列各不相同,從數(shù)百至數(shù)千堿基不等,但大多數(shù)真核細胞mRNA在其3"端均有一寡聚腺苷酸(polyA)組成的尾,其長度一般足以吸附于寡聚脫氧胸苷酸—纖維素