一、細(xì)胞的裂解 
單層細(xì)胞的裂解 
懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞或組織單細(xì)胞懸液的裂解 
a．單層細(xì)胞的裂解 
a）吸出培養(yǎng)液，以7ml用冰預(yù)冷的無(wú)鈣鎂離子磷酸緩沖鹽溶液PBS沖洗細(xì)胞培養(yǎng)皿內(nèi)的單層細(xì)胞，重復(fù)1次，將平板置于冰上直至所有單層細(xì)胞沖洗完畢。也可將平板放在一塊鋁板上，再將鋁板置于冰盤上。 
b）直徑為90mm的培養(yǎng)皿需加0.5ml RNA提取緩沖液， 并使之遍布整個(gè)平板的表面。 
RNA提取緩沖注液 
0.14mol/L NaCL 
1.5mmol/L MgCL2 
10mmol/L Tris.CL(pH8.6) 
0.5％NP-40 
1mmol/L二硫蘇糖醇（DTT） 
100單位/ml胎盤rna酶抑制劑或20mmol/L氧釩核糖核苷復(fù)合物 
c）加0.5ml蛋白酶消化緩沖液，用刮棒混勻粘稠狀裂解物并將其刮到平板的邊緣。 
蛋白酶消化緩沖液 
0.2mol/L Tris.Cl(pH8.0) 
25mmol/L EDTA(pH8.0) 
0.3mol/L NaCl 
2％ SDS 
d）用裝有21號(hào)針頭的皮下注射器抽吸細(xì)胞裂解物，再將其注入聚丙烯管內(nèi)。重復(fù)3－4次，剪切DNA。 
c）加蛋白酶K至終濃度為200μg/ml，充分混勻后置于37℃溫育30分鐘。 
蛋白酶K以貯存液的形式保存，貯存液為20mg/ml 蛋白K溶液。 
b．懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞或組織單細(xì)胞懸液的裂解 
a）于4℃以2000g離心5分鐘收集細(xì)胞，以10倍體積用冰預(yù)冷的無(wú)鈣鎂離子磷酸緩沖液懸沉淀，洗滌細(xì)胞3次，每次均用大口徑的吸管輕輕吹打細(xì)胞沉淀，使其*分散。 
b）估計(jì)細(xì)胞沉淀的體積，用10-20倍體積的RNA提取緩沖液重懸之。 
c）加入與步驟b）所加RNA提取緩沖液體相同的蛋白酶消化緩沖液，用振蕩器迅速混勻。用裝有21號(hào)針頭的皮下注射器抽吸細(xì)胞裂解物，再將其注入聚丙烯管內(nèi)。重復(fù)3－4次，剪切DNA。 
d）加蛋白酶K至終濃度為200μg/ml，充分混勻后置于37℃溫育30分鐘。蛋白酶K以貯存的形式保存，貯存液為20μg/ml蛋白酶K水溶液。 
二、提取步驟 
1）用等體積酚：仿抽提1次，以去除蛋白質(zhì)。