細胞培養(yǎng)是將器官、組織或細胞從生物機體中取出,模擬該器官、組織或細胞在機體內(nèi)的生理條件,在體外進行培養(yǎng),使其能夠繼續(xù)生存、生長和繁殖。一些研究結(jié)果表明,許多種類的動物或植物的細胞都能在人工培養(yǎng)條件下生存、生長和繁殖。
現(xiàn)代的動物細胞培養(yǎng)始于美國動物學R.G.Harrison。他于1906年在無菌條件下,以淋巴液做培養(yǎng)基,培養(yǎng)了蝌蚪的神經(jīng)板,并觀察到神經(jīng)細胞突起生長的過程。到了20世紀后半葉,隨著分子生物學和細胞生物學的崛起,為了在活細胞中研究生命現(xiàn)象,細胞培養(yǎng)方法得到了廣泛的發(fā)展和應用。
細胞培養(yǎng)的突出優(yōu)點,一是便于研究各種物理、化學等外界因素對細胞生長、發(fā)育和分化等的影響。因為人工培養(yǎng)條件易于改變,并能得到嚴格的控制,有利于單因子分析。二是細胞培養(yǎng)便于我們對細胞生長、發(fā)育過程的觀察,可以用顯微鏡直接觀察亦可應用顯微縮時電影技術記錄其進程。因而,細胞培養(yǎng)是探索和解釋細胞生命活動規(guī)律的一種簡而易行的技術。
然而,細胞培養(yǎng)方法也有其局限性,由于培養(yǎng)的細胞生活在脫離了機體的復雜的環(huán)境條件下,其生態(tài)環(huán)境和細胞之間的相互關系都改變了,因此,其細胞生物學性質(zhì)必然也會發(fā)生某些改變。所以在人工培養(yǎng)條件下觀察到的結(jié)果難于正確反映細胞或組織在機體內(nèi)部的狀況。這一點是我們在應用此技術進行研究時應該注意的。
盡管如此,由于細胞培養(yǎng)技術的優(yōu)點是其他實驗方法和技術所不能比擬的,所以近年來,細胞培養(yǎng)技術在分子生物學、遺傳學、老年學、免疫學、腫瘤學和病毒學等很多領域都得到了廣泛的應用,并取得了很多重大的成果。
細胞培養(yǎng)是一種程序復雜而又要求十分嚴謹?shù)膶嶒灱夹g。要使細胞在體外生存,必須模擬體內(nèi)環(huán)境,共給細胞存活所必需的條件。如供給適量的水、無機鹽、氨基酸、維生素、葡萄糖以及有關的生長因子;氧氣及適宜的溫度;注意調(diào)節(jié)其外環(huán)境的酸堿度(pH)與滲透壓;以及為排除細胞代謝產(chǎn)物的危害,保持良好適宜的外環(huán)境而進行必需的傳代等等。所有這一切條件與操作都要保持在無菌條件下進行。
一、目的與要求
通過本實驗了解原代細胞與傳代細胞培養(yǎng)的基本方法以及在細胞培養(yǎng)過程中嚴格的操作程序。
初步掌握無菌操作的基本原則,認識無菌操作在細胞培養(yǎng)中的重要性。
二、實驗內(nèi)容
1、原代細胞的制作——示范
2、傳代細胞的傳代
三、實驗步驟
(一)原代細胞的制作——以乳鼠腎細胞原代單層靜置培養(yǎng)為例,按實驗時操作的順序進行描述。
1.操作者首行手的清洗與消毒,再將實驗用品放在合適的位置,然后配置營養(yǎng)液及調(diào)節(jié)平衡鹽液的pH值。