一、改良的鄰甲苯胺硼酸法 (O-TB 法 )

要 求

1．了解血糖微量測定的基本原量。

2．掌握血糖正常水平及其測定的臨床意義。

3．復習血糖的來源、去路及其調(diào)節(jié)的有關理論知識。

原 理

葡萄糖為一含醛基的己糖，在酸性條件下加熱，可脫水生成5-羥甲基-2-呋喃甲醛，后者與鄰甲苯胺縮合成一綠青色的化合物，其顏色的深淺與樣品中葡萄糖的含量正成比，與進行同樣處理的標準葡萄糖液相比較可求出樣品中葡萄糖的含量。

正常血糖水平為80~120毫克/100ml，在糖尿病及腎上腺皮質(zhì)機能亢進和腦下垂體機能亢進的患者血中葡萄糖含量可顯著升高，饑餓時，血糖水平可下降。

試 劑

1．O-TB試劑

2．葡萄糖標準液(1.0毫克/毫升)。

器 材

1．硬質(zhì)中試管 三支。

2．刻度吸管 ：0.1毫升三支；5毫升一支。

操 作

取硬質(zhì)中試管 三支，分別標以1、2、3號，按下表操作：混勻后同時將三支試管置于100℃水浴 中，如熱5~6分鐘后，取出用冷水冷卻，在30分鐘內(nèi)用722型分光光度計 在620nm比色。以空白管調(diào)零，分別測得A_樣 和A_標 。

計 算

每100毫升血漿中葡萄糖含量(毫克)

= ×０.１×1000= ×100

附注：如血中葡萄糖糖量過高，顏色太深，可于樣品管中加倍加入O-TB試劑，加熱冷卻后比色，并將zui后的計算結果乘2，即得每100毫升血漿中葡萄糖的含量。

試劑配制

1.O-TB試劑

冰醋酸 883.2 毫升

硫脲 1.5克

鄰甲苯胺 76.8 毫升

硫脲在冰醋酸中溶解后加鄰甲苯胺混合，再加飽和硼酸溶液40毫升。

充分混勻后放入褐色內(nèi)貯存?zhèn)溆?，一般可貯存幾個月。

附：飽和硼酸溶液：稱取硼酸6克溶于100毫升蒸餾 水中，放置一夜過濾即可應用。

2.葡萄糖標準貯存液：每毫升10.0毫克，用0.25%安息香酸溶液配制。

3.葡萄糖標準應用液：每毫升1.0毫克，用0.25%安息香酸溶液將貯存液稀釋十倍(3%三氯醋酸可代替安息香酸溶液)。

二、葡萄糖氧化酶 法

原 理

在pH7.0條件下，葡萄糖氧化酶 可催化血樣中葡萄糖氧化生成葡萄糖酸及過氧化氫。后者在過氧化物酶的作用下與*，4—氨基安替毗啉氧化縮合成紅色醌式物質(zhì)，在505nm處有zui大吸收峰，標本中葡萄糖含量與吸光度成正比，可求得血樣中葡萄糖含量。用本法測定葡萄糖具有高度特異性，因此其準確度遠比O-TB法為高，更能反映了血中葡萄糖的真實含量，是為科研工作中常用的葡萄糖測定方法。隨著試劑藥盒的推廣普及，此法也已廣泛應用于臨床檢測。其反應過程如下：

葡萄糖氧化酶

β—D葡萄糖+O₂ +H₂ O D —葡萄糖酸+H₂ O₂

過氧化物酶

H₂ O₂ +4—氨基安替吡啉+* H₂ O+ 紅色醌式物質(zhì)

操 作

取硬質(zhì)中試管三支，分別標以1.2.3號，按下表操作：

混勻后37℃保溫15分鐘，使用722型分光光度計 在505nm波長下比色，以空白管調(diào)零，分別測得A_樣 和A_標 。

計 算

葡萄糖含量mg/dl= ×100

100為標準液濃度值mg/dl

試 劑

葡萄糖（氧化酶法）測定試劑盒