[方法]
1．在0．5ml微量離心管中配制50ul PCR反應(yīng)混合液， 包括：
● Millipore水， 31.5ul
● 10×VentDNA聚合酶緩沖液，5．0ul
● 20×dNTP， 2．5ul
● 正向引物，2．0ul
● 反向引物，2．0ul
● 來(lái)自實(shí)驗(yàn)方案13．2的cDNA反應(yīng)混合液，5．0ul
2．在熱循環(huán)儀格內(nèi)加熱反應(yīng)體系到94℃5分鐘。如果沒(méi)有加熱蓋，則滴加1滴輕質(zhì)礦物油覆蓋反應(yīng)液。
3．加入2．0ul（2單位）VentDNA聚合酶。
4．以94℃1分鐘、60℃1分鐘、?2℃1分鐘的條件共循環(huán)30次，擴(kuò)增V基因。
5．用0．5％瓊脂糖凝膠電泳純化PCR片段；按照廠家說(shuō)明書(shū)， 用Geneclean試劑盒從膠中提取目的組分。將每種產(chǎn)物重懸于20ul水中。在1％瓊脂糖凝膠中，與已知大小和濃度的標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品比較，測(cè)定目的DNA濃度。