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膠體金離子標記小鼠抗*單克隆抗體IgG

時間:2013-2-28閱讀:504
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膠體金離子標記小鼠抗*單克隆抗體IgG

抗原修復——原因 
*
常規(guī)的石蠟切片標本均用甲醛固定,結果使得: 
-
抗原性物質形成醛鍵、羧甲鍵而被封閉了部分抗原決定簇; 
-
蛋白之間發(fā)生交聯(lián)而使抗原決定簇隱蔽。 
*
要求:在染色時,需要*行抗原修復或暴露,即將固定時分子之間所形成的交聯(lián)破壞,而恢復抗原的原有空間形態(tài)。 

抗原修復——方法 
*
化學方法 
*
加熱方法 
-
水浴加熱法 
-
微波照射法 
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高壓加熱法 
-
酸水解法 

化學方法 
*
主要是通過一些酶的作用,使抗原決定簇暴露。常用的酶有:*、*等。 
C
,1040min,主要用于細胞內抗原的顯示;°-*:一般使用濃度為0.05%~0.1%,消化時間為37 
C
30180min,主要用于細胞間質抗原的顯示。°-*:一般使用濃度為0.1%0.4%,消化時間為37 
*
例如:Laminin、CollagenIV 

化學方法 
*
主要是通過一些酶的作用,使抗原決定簇暴露。常用的酶有:*、*等。 
C
,1040min,主要用于細胞內抗原的顯示;°-*:一般使用濃度為0.05%~0.1%,消化時間為37 
C
、30180min,主要用于細胞間質抗原的顯示。°-*:一般使用濃度為0.1%0.4%,消化時間為37 
*
例如:Laminin、CollagenIV 

水浴加熱法 
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將玻片放入裝有抗原修復液的容器中,加熱至沸騰,持續(xù)1015分鐘。 
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優(yōu)點:操作簡單、經(jīng)濟,適用于所有的實驗室, 
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缺點:對封閉牢固的抗原決定簇暴露不理想。 

微波照射法 
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將玻片放入裝有抗原修復液的容器中,置微波爐加熱至95以上,持續(xù)l015分鐘,冷卻后,按免疫組化染色步驟進行。 
*
此方法由于微波場內極性分子、離子高速運動,撞擊交聯(lián)的網(wǎng)鏈,使抗原異常的構想恢復正常,且因分子運動產(chǎn)熱、效率高、時間短,對抗原再現(xiàn)效果好。 

高壓加熱法暴露抗原 
*
將玻片浸入抗原修復液內,置高壓鍋中高壓23min,可取得*的效果。 
*
由于高壓下受熱均勻,特別使用于大批量標本的染色。 

 

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