第八因子相關(guān)抗原抗體相關(guān)信息

【肝粉的制法】 
（1）將若干只小白鼠或大白鼠放血?dú)⑺溃〕龈闻K，用生理鹽水洗2～3次，除去血液，剝掉表面的結(jié)締組織的脂肪。 
（2）剪碎，用生理鹽水反復(fù)洗滌至無(wú)血色止，然后再加生理鹽水少許，用組織搗碎機(jī)或勻漿器作成勻漿。 
（3）將肝勻漿裝入離心管內(nèi)（1/3左右），交換地用2～3倍量生理鹽水和丙酮反復(fù)洗滌各三次，至上清無(wú)血色止，每次完畢先用2000r/min離心沉淀15 min后，再除去上清液。 
（4）zui后用丙酮洗滌肝漿，再用布氏漏斗過(guò)濾，或離心沉淀，將沉淀物平鋪在潔凈的玻璃板上，37℃烤干（過(guò)夜）。 
（5）在乳缽中充分研磨，用120目銅篩篩選過(guò)后，分裝，密封，低溫干燥保存。 
（二）透析法 
熒光素如FITC分子可以通過(guò)半透膜，而蛋白質(zhì)大分子不能透過(guò)，可將未與蛋白結(jié)合的熒光素透析除去。 
（1）將標(biāo)記完畢的熒光蛋白液裝入一透析袋或玻璃紙袋內(nèi)，液面稍留空隙，緊扎。 
（2）浸入0.02mol/pH 
7.1～7.4的PBS中（懸于大于標(biāo)記物體積約50～100倍的PBS內(nèi)），在4℃中透析，每日更換3～4次PBS，約5～7天，透析液中無(wú)熒即可（在熒光光源照射下）。 
（三）葡聚糖凝膠G-50柱層析法 
除游離熒光素可用2×46cm柱層析法，詳細(xì)方法參閱第二章。加入熒光抗體15～18ml（按床體積的5%～10%加樣），使其緩慢滲入柱內(nèi)，待即將全部入柱時(shí)，加入PBS少許，關(guān)閉下口，停留30～40min ，使游離熒光充分進(jìn)入細(xì)篩孔中，然后再接通洗脫瓶開始滴入洗脫液。加入洗脫液一定量后，熒光抗體即向下移行，逐漸與存留于上端的游離熒光素之間拉開明顯的界線，隨著大量洗脫液的不斷加入，二者分離距離越來(lái)越大，熒光抗體zui先流出，分前、中、后三部分收集，測(cè)F/P比值，合格者合并，濃縮，分裝。洗脫液用20%磺基水楊酸測(cè)定蛋白（發(fā)生沉淀反應(yīng)），繼續(xù)洗脫，游離熒光素則相繼被洗脫下來(lái)，至洗脫液中無(wú)蛋白和熒光素后，此層析柱即可再用。 
若用以除去熒光抗體中的游離熒光素和硫酸銨等鹽類，可先在過(guò)柱前透析一夜，否則，NH4+太濃，在蛋白未*洗脫時(shí)即出現(xiàn)NH4+，因而影響提純與回收蛋白，一般待洗脫液出現(xiàn)蛋白時(shí)，即進(jìn)行收集，之后出現(xiàn)SO4++（用1%BaCl2檢查發(fā)生白色沉淀）。zui后是NH4+，（用納氏試劑檢查呈黃棕色沉淀），待洗脫液無(wú)SO4++及NH4+后可再用。 
如僅用小量熒光抗體，可用1×20cm的柱層析柱，取2g Sephadex G-50裝柱，即可過(guò)濾2～3.5ml熒光抗體。  第八因子相關(guān)抗原抗體相關(guān)信息 
（四）DEAE纖維素柱層析法 
標(biāo)記過(guò)多或過(guò)少熒光素的抗體分子可用DEAE-纖維素柱層析法除去。方法如下： DEAE-纖維素柱的裝柱，洗脫、再生方法等與提純IgG方法相同。裝柱所需DEAE-纖維素量以干重每克交換20～50mg標(biāo)記蛋白量為宜