內(nèi)質(zhì)網(wǎng)Aβ相關(guān)結(jié)合蛋白抗體相關(guān)信息

WB操作規(guī)程
1．設(shè)備和試劑
① 電泳電源
Mini-PROTEAN 3 Elecreophoresis Cell,Mini Teans-Blot Module,and PowerPac Basic Power Supply （BIO-RAD,Catalog#165-3323）
② 電泳儀及附件
Mini-PROTEAN 3 Elecreophoresis Cell （BIO-RAD,Catalog#165-3301）
③ 電轉(zhuǎn)儀及附件
Mini Teans-Blot Elecreophoresis Transfer Cell （BIO-RAD,Catalog#170- 3930）
④ NC膜
PIERCE，Catalog#88018
⑤ 濾紙
Whatman,3MM CHR

2.試劑
① 凝膠試劑
試劑名稱        廠家及規(guī)格
30%丙烯酰胺溶液        上海生工
Tris-Base        SIGMA
10%SDS        SIGMA
10%過硫酸銨        上海生工
TEMED        上海生工
② 常用溶液及緩沖液
A．5%積層膠所用溶液
B．分離膠溶液
C．電泳緩沖液，1L
3g Tris-Base、14.4g *、1g SDS，加蒸餾水至IL，pH應(yīng)該在8.3左右。也可以制成10×的儲(chǔ)存液，在室溫下長(zhǎng)期保存
D．電泳轉(zhuǎn)移緩沖液,1L
3g Tris-Base、14.4g *、甲醇200ml, 加蒸餾水至1L, 也可以制成10×的儲(chǔ)存液，在濕溫下長(zhǎng)期保存
E．5×樣品緩沖液,10ml
0.6ml 1mol/L的Tris-HCl（Ph6.8）、5ml 50%的甘油、2ml 10%的SDS、0.5ml 2-巰基乙醇、1ml 1%溴酚藍(lán)，0.9ml的蒸餾水，可在4℃保存數(shù)周，或在-20℃保存數(shù)月。
③ 二抗稀釋液
AP-Anti mouse IgG（Whole molecule）,SIGMA,CAT#A-3562;
AP-Anti mouse IgGAM,ZYMED,CAT#62-6422
一般采取1:3000-1:5000的稀釋度，用1%BSA-PBS（含0.05%TWEEN20）稀釋
④ 顯色底物緩沖液
A.HRP標(biāo)記二抗底物緩沖液 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)Aβ相關(guān)結(jié)合蛋白抗體相關(guān)信息 
DAB KIT（KPL LOT NO YM107 CAT：54-10-00）, Tris Buffer 3滴，DAB Substrate 3滴,Peroxide solution 2滴于5ml蒸餾水中，避光，混勻
B.AKP標(biāo)記二抗底物緩沖液
AKP緩沖液：
0.1mol/L Tris-HCL（PH9.5）, 0.1mol/L NaCL, 5mmol/L MgCL2
BCIP溶液/NBT溶液：
50mg/ml BCIP溶于100%二甲基甲酰胺
50mg/ml BCIP溶于70%二甲基甲酰胺
⑤ 其他試劑
A．        考馬斯亮藍(lán)染液，1L
考馬斯亮藍(lán)R-250 1.0g、甲醇 450ml、冰醋酸 100ml
B．        考馬斯亮藍(lán)脫色液
甲醇 100ml、冰醋酸 100ml、蒸餾水800ml