ATP結(jié)合蛋白家族5抗體說明，Anti-ABCB5

操作方法
1．取20ml血清，加生理鹽水20ml，再逐滴加入（NH4）2SO4飽和溶液10ml，使成20％（NH4）2SO4溶液，邊加邊攪拌，充分混合后，靜置30min。
2．3 000r/min離心20min，棄去沉淀，以除去纖維蛋白。
3．在上清液中再加（NH4）2SO4飽和溶液30ml，使成50％（NH4）2SO4溶液，充分混合，靜置30min。
4．3 000r/min離心20min，棄上清。
5．于沉淀中加20ml生理鹽水，使之溶解，再加（NH4）2SO4飽和溶液10ml，使成33％（NH4）2SO4溶液，充分混合后，靜置30min。
6．        3 000r/min離心20min，棄上清，以除去白蛋白。重復(fù)步驟5，2~3次。
7．        用10ml生理鹽水溶解沉淀，裝入透析袋。
8．        透析除鹽，在常水中透析過夜，再在生理鹽水中于4℃透析24h，中間換液數(shù)次。
以1％BaCl2檢查透析液中的SO42-或以納氏試劑檢查NH4+（取3~4ml透析液，加試劑1~2滴，出現(xiàn)磚紅色即認為有NH4+存在），直至無        SO42-或NH4+出現(xiàn)為止。也可采用SephadexG25或電透析除鹽。
9．        離心去沉淀（去除雜蛋白），上清液即為粗提IgG （即γ球蛋白，如以36％的飽和硫酸銨沉淀血清的產(chǎn)物即為優(yōu)球蛋白，Euglobin，含γ球蛋白）。
    10．過DEAE－纖維素層析柱。（裝柱過程見層析技術(shù)）。以0.01Mol/L pH7.4PBS（0.03Mol/L NaCl）洗脫，收集洗脫液。
也可采用SephadexG150或G200柱。 ATP結(jié)合蛋白家族5抗體說明，Anti-ABCB5 
    11．蛋白質(zhì)及其定量鑒定（見本章第八節(jié)）。
    12．IgG的純度鑒定  可采用下列方法之一鑒定。
⑴ 區(qū)帶電泳：玻片瓊脂或醋酸纖維膜電泳均可。加樣電泳后，只在γ—球蛋白的遷移部位出現(xiàn)一條帶。操作時，同時可用全血清樣品，不同濃度（NH4）2SO4鹽析樣品進行電泳，以資比較。
⑵ 瓊脂雙相雙擴散鑒定：預(yù)先準備該IgG免疫異種動物所獲的抗IgG血清。將IgG與抗IgG血清進行雙相雙擴散，如IgG提純的話，則在兩樣品孔之間出現(xiàn)一條沉淀線。
⑶ 免疫電泳鑒定：（操作見第三章免疫電泳部分）?？變?nèi)加待測樣品，電泳后，在槽內(nèi)加抗IgG血清，瓊脂擴散24h，觀察結(jié)果。如果提取的IgG純的話，則只出現(xiàn)一條弧形的沉淀線，且沉淀線位于γ—球蛋白區(qū)。此鑒定必須同時進行全血清及抗血清抗體的免疫電泳，以資比較。
⑷ 圓盤電泳鑒定：用全血清樣品及提純樣品同時進行圓盤電泳。全血清樣品在圓盤電泳上出現(xiàn)數(shù)十條區(qū)帶，而純化的IgG則只有一條區(qū)帶。