熒光素標(biāo)記促甲狀腺素釋放激素抗體IgG，Anti-TRH/FITC

為了讓實(shí)驗(yàn)更加嚴(yán)謹(jǐn)有說服力都要設(shè)計(jì)對(duì)照實(shí)驗(yàn)，對(duì)照分為：陽性對(duì)照（有標(biāo)準(zhǔn)品（比如β-actin，GAPDH）或陽性血清）；陰性對(duì)照（測(cè)血時(shí)用相應(yīng)小鼠未免疫血清（即正常血）；空白對(duì)照（不加一抗，用PBS代替）；無關(guān)對(duì)照（用無關(guān)抗體）

實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)時(shí)所釆用的抗原批次要一樣，盡量的避免人為的帶來個(gè)體差異。特別在做裂解液時(shí)更要注意所釆用的操作條件，盡可能的排除可變因素給實(shí)驗(yàn)帶來不確定性。
凝膠的質(zhì)量直接影響以后的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，要特別注意幾點(diǎn)：凝膠要均一沒有氣泡；積層膠與分離膠界面要水平；AP和TEMED的量不能過多，太多會(huì)導(dǎo)致膠易脆裂；拔梳子時(shí)要快，盡量保證點(diǎn)樣孔平整。

加一抗二抗要嚴(yán)格保證反應(yīng)時(shí)間，洗膜要注意盡可能地將一抗二抗洗凈，有利于降低背景；還要注意一抗二抗的匹配。

在顯色發(fā)光時(shí)要特別注意二抗所對(duì)應(yīng)的顯色方法，特別是在發(fā)光時(shí)要注意發(fā)光時(shí)間和顯影時(shí)間的控制，以看得清楚目的條帶為標(biāo)準(zhǔn)。

Western bloting是用來對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行檢測(cè)的一種常用方法，通過抗原抗體的免疫反應(yīng)可以定量測(cè)出抗體的相對(duì)分子量，以及抗體的相對(duì)豐度或與已知抗原的關(guān)系等等。目前它應(yīng)用在多個(gè)領(lǐng)域,在臨床上檢測(cè)傳染病和自身免疫病、過敏癥等，在抗體生產(chǎn)領(lǐng)域它與ELISA、ICC、IHC、IFA等免疫技術(shù)相接合已成為單克隆抗體生產(chǎn)的主要篩選手段。