辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記V5 tag標(biāo)簽抗體IgG，Anti-V5 tag/HRP

免疫檢測(cè)
一抗與靶蛋白的結(jié)合
① 封閉的膜用PBST漂洗2-3次。
② 將加樣槽洗滌干凈，用蒸餾水潤(rùn)洗，晾干，將膜用一次性手套覆蓋好，按標(biāo)記和實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)切下膜條（一般為3 mm寬左右）按順序置于加樣槽中，作好實(shí)驗(yàn)記錄，加入相應(yīng)的一抗約1ml，注意保證膜的所有部分同溶液接觸。
③ 室溫下于搖床孵育2h或4℃過(guò)夜。
④ 棄去一抗，膜條仍置于加樣槽，每個(gè)槽加2-3 mlPBST，上搖床洗滌洗滌5-10min ，換液，反復(fù)4次。
  酶標(biāo)記二抗與一抗的結(jié)合
① 根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要和設(shè)計(jì)選擇合適的酶標(biāo)二抗和稀釋濃度（用含0.5%脫脂奶粉的PBS稀釋?zhuān)?，每個(gè)加樣槽中加入二抗1ml左右室溫下于搖床孵育1h或4℃過(guò)夜，注意保證膜的所有部分同溶液接觸。
②棄去二抗，膜條仍置于加樣槽，每個(gè)槽加2-3 mlPBST，上搖床洗滌洗滌5-10min ，換液，反復(fù)4次。

顯色反應(yīng)（注：二抗一般有兩種常用標(biāo)記酶，HRP和AP，其相對(duì)應(yīng)的顯色底物試劑盒為DAB和BCIP/NBT）
① HRP標(biāo)記二抗顯色
   用DAB KIT（KPL LOT NO YM107 CAT：54-10-00）顯色，按順序依次加Tris Buffer 3滴，DAB Substrate 3滴,Peroxide solution 2滴于5ml蒸餾水中，避光，混勻，將膜加入顯色液中避光顯色15 min左右終止反應(yīng)，記錄實(shí)驗(yàn)結(jié)果，將NC膜晾干掃描保存
②        AKP標(biāo)記二抗顯色
   用AKP緩沖液洗膜5min，棄去AP緩沖液，加入顯色液（66µlNBT溶液同10mlAKP緩沖液充分混合均勻后加入33µl BCIP溶液1h內(nèi)使用），室溫下顯色（37℃可加速反應(yīng)），顯色反應(yīng)通常在30min內(nèi)可完成。用20mM EDTA/TBS洗膜終止反應(yīng),記錄實(shí)驗(yàn)結(jié)果，將NC膜晾干掃描保存。反應(yīng)溶液可預(yù)先配置，可在4℃儲(chǔ)存一年以上。