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249次伴肌動(dòng)蛋白抗體,Anti-Nebulin抗體的效價(jià)鑒定 不管是用于診斷還是用于治療,制備抗體的目的都是要求較價(jià)。不同的抗原制備的抗體,要求的效價(jià)不一。鑒定效價(jià)的方法很多,包括有試管凝集反應(yīng)、瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)9ELISA)等。常用的抗原所制備的抗體一般都有約成的鑒定效價(jià)的方法,以資比較。如制備抗抗體的效價(jià),一般就采用瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)來(lái)鑒定。
抗體的特異性鑒定 抗體的特異性是指與相應(yīng)抗原或近似抗原物質(zhì)的識(shí)別能力。抗體的特異性高,它的識(shí)別能力就強(qiáng)。衡量特異性通常以交叉反應(yīng)率來(lái)表示。交叉反應(yīng)率可用競(jìng)爭(zhēng)抑制試驗(yàn)測(cè)定。以不同濃度抗原和近似抗原分別做競(jìng)爭(zhēng)抑制曲線,計(jì)算各自的結(jié)合率,求出各自在 IC50時(shí)的濃度,并按下列公式計(jì)算交叉反應(yīng)率。 如果所用抗原濃度IC50濃度為pg/管,而一些近似抗原物質(zhì)的IC50濃度幾乎是無(wú)窮大時(shí),表示 這一抗血清與其他抗原物質(zhì)的交叉反應(yīng)率近似為 0,即該血清的特異性較好。
抗體的親和力 是指抗體和抗原結(jié)合的牢固程度。親和力的高低是由抗原分子的大小、抗體分子的結(jié)合位點(diǎn)與抗原決定簇之間立體構(gòu)型的合適度決定的。有助于維持抗原抗體復(fù)合物穩(wěn)定的分子間力有氫鍵、疏水鍵、側(cè)鏈相反電荷基因的庫(kù)侖力、范德華力和空間斥力。親和力常以親和常數(shù)K表示,K的單位是L/mol,通常K的范圍在 108 ~1010 /mol,也有多達(dá) 1014 /mol??贵w親和力的測(cè)定對(duì)抗體的篩選,確定抗體的用途,驗(yàn)證抗體的均一性等均有重要意義。
免疫用的動(dòng)物選擇適齡的健康雄性動(dòng)物,雌性動(dòng)物特別是妊娠動(dòng)物用于制備免疫抗體則非常不合適,有時(shí)甚至不產(chǎn)生抗體。由于對(duì)免疫應(yīng)答的個(gè)別差異,免疫時(shí)應(yīng)同時(shí)選用數(shù)只動(dòng)物進(jìn)行免疫。 抗原是多種多樣的,而且千差萬(wàn)別。就其化學(xué)成分而言,有蛋白質(zhì)抗原、類脂抗原、多糖類抗原和核酸抗原等。就抗原性而言,有*抗原和不*抗原。為了獲得較好的抗血清,是選用蛋白質(zhì)抗原,如要制備用于篩選細(xì)菌表達(dá)的 cDNA 文庫(kù)或免疫印跡的抗血清,選用可降解的蛋白質(zhì)抗原。不同的抗原,其免疫原性的強(qiáng)弱均不相同,這種免疫原性的強(qiáng)弱取決于抗原的分子量、化學(xué)活性基團(tuán)、立體結(jié)構(gòu)、物理形狀和彌散速度等。
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