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上海科興商貿(mào)有限公司

從細(xì)菌和酵母中提取gDNA的簡便方法

時(shí)間:2015-3-17閱讀:225
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    從微生物中提取基因組DNA,人們多采用異硫氰酸胍進(jìn)行裂解,不過對于有些細(xì)菌而言,仍需要繁瑣的預(yù)處理。

    研究人員開發(fā)出一種快速而經(jīng)濟(jì)的gDNA提取方法,適用于各種濃度的細(xì)菌和酵母。為了加速微生物的檢測和分析,許多分子生物學(xué)技術(shù)都經(jīng)過了優(yōu)化,如PCR、質(zhì)譜和測序。然而,DNA提取方法卻始終未見大的進(jìn)展。異硫氰酸胍處理和硅膠柱的方法能夠從革蘭氏陰性菌中很好地提取DNA,但革蘭氏陽性菌或抗酸的細(xì)菌和酵母仍需要酶學(xué)或機(jī)械預(yù)處理。對于血液或尿液這種存在不同類型微生物的樣品而言,這很麻煩。

    人們也嘗試了各種策略來增強(qiáng)異硫氰酸胍對微生物的裂解,包括機(jī)械法、酶學(xué)或化學(xué)處理。機(jī)械處理也許是zui常用的方法,但可能將gDNA剪切成小的片段,限制PCR擴(kuò)增子的量。對于含有不同類型微生物的樣品,這個(gè)問題就變得更加復(fù)雜,因?yàn)椴煌⑸锟赡苄枰煌奈⒅楹吞幚頃r(shí)間。酶學(xué)和化學(xué)裂解通常也是因微生物而異,往往更耗時(shí)。在這項(xiàng)研究中,研究人員采用了一種稱為EtNa的新方法。它通過加熱乙醇堿性溶液而釋放出細(xì)菌和酵母中的單鏈DNA,關(guān)鍵是不同微生物的提取效率相似。當(dāng)微生物的身份未知,或提取不得忽視或偏向特定微生物時(shí),這種方法就很有用。

    研究人員認(rèn)為,他們開發(fā)出一種快速、經(jīng)濟(jì)而可靠的裂解酵母和細(xì)菌的方法。EtNa試劑可用于臨床診斷或生物醫(yī)學(xué)研究中,在25分鐘內(nèi)處理各種生物樣品。通過這種方法獲得的ssDNA可直接使用,或經(jīng)過硅膠柱進(jìn)一步純化。

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