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微生物生長的幾種檢測方法

微生物介紹：

試劑紙法：

　　微生物的檢測，無論在理論研究還是在生產實踐中都具有重要的意義，本文分生長量測定法，微生物計數法，生理指標法和商業(yè)化快速微生物檢測簡要介紹了利用微生物重量，體積，大小，生理代謝物等指標的二十余種常用的檢測方法，簡要介紹了這些方法的原理，應用范圍和優(yōu)缺點。

生長量測定法

　　體積測量法：又稱測菌絲濃度法。

　　通過測定一定體積培養(yǎng)液中所含菌絲的量來反映微生物的生長狀況。方法是，取一定量的待測培養(yǎng)液（如10毫升）放在有刻度的離心管中，設定一定的離心時間（如5分鐘）和轉速（如5000 rpm），離心后，倒出上清夜，測出上清夜體積為v，則菌絲濃度為（10-v）/10。菌絲濃度測定法是大規(guī)模工業(yè)發(fā)酵生產上微生物生長的一個重要監(jiān)測指標。這種方法比較粗放，簡便，快速，但需要設定一致的處理條件，否則偏差很大，由于離心沉淀物中夾雜有一些固體營養(yǎng)物，結果會有一定偏差。

　　稱干重法：

　　可用離心或過濾法測定。一般干重為濕重的10-20%。在離心法中，將一定體積待測培養(yǎng)液倒入離心管中，設定一定的離心時間和轉速，進行離心，并用清水離心洗滌1-5次，進行干燥。干燥可用烘箱在105℃或100℃下烘干，或采用紅外線烘干，也可在80℃或40℃下真空干燥，干燥后稱重。如用過濾法，絲狀真菌可用濾紙過濾，細菌可用醋酸纖維膜等濾膜過濾，過濾后用少量水洗滌，在40℃下進行真空干燥。稱干重發(fā)法較為煩瑣，通常獲取的微生物產品為菌體時，常采用這種方法，如活性*（activity  dry  yeast, ADY）,一些以微生物菌體為活性物質的飼料和肥料。

　　在平板計數法的基礎上，發(fā)展了小型商品化產品以供快速計數用。形式有小型厚濾紙片，瓊脂片等。在濾紙和瓊脂片中吸有合適的培養(yǎng)基，其中加入活性指示劑2，3，5-氯化三苯基四氮唑（TTC，無色）待蘸取測試菌液后置密封包裝袋中培養(yǎng)。短期培養(yǎng)后在濾紙上出現(xiàn)一定密度的玫瑰色微小菌落與標準紙色板上圖譜比較即可估算出樣品的含菌量。試劑紙法計數快捷準確，相比而言避免了平板計數法的人為操作誤差。

生理指標法：

　　微生物的生長伴隨著一系列生理指標發(fā)生變化，例如酸堿度，發(fā)酵液中的含氮量，含糖量，產氣量等，與生長量相平行的生理指標很多，它們可作為生長測定的相對值。測定含氮量：

　　大多數細菌的含氮量為干重的12.5%，酵母為7.5%，霉菌為6.0%。根據含氮量×6.25，即可測定粗蛋白的含量。含氮量的測定方法有很多，如用硫酸，過氯酸，碘酸，磷酸等消化法和Dumas測N₂氣法。Dumas測N₂氣法是將樣品與CuO混合，在CO₂氣流中加熱后產生氮氣，收集在呼吸計中，用KOH吸去CO₂后即可測出N₂的量。

　　測定含碳量：

　　將少量（干重0.2-2.0 mg）生物材料混入1毫升水或無機緩沖液中，用2毫升2%的K₂Cr₂O₇溶液在100 ⁰C下加熱30分鐘后冷卻。加水稀釋至5毫升，在580nm的波長下讀取吸光光度值，即可推算出生長量。需用試劑做空白對照，用標準樣品做標準曲線。