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*ELISA試劑盒

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蘇州艾瑞德生物科技有限公司

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產(chǎn)品簡(jiǎn)介

歡迎訪(fǎng)問(wèn)公司：http://www.ardbio.cn 蘇州艾瑞德生物科技有限公司是一家*的生物科研產(chǎn)品與合同供應(yīng)商，是國(guó)內(nèi)專(zhuān)注于食品安全檢測(cè)、動(dòng)物疫病檢測(cè)以及相關(guān)領(lǐng)域的高科技生產(chǎn)型企業(yè)。*以來(lái)，產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定*，并與國(guó)內(nèi)的檢驗(yàn)檢疫管理部門(mén)及*科研院所等機(jī)構(gòu)密切合作，研究開(kāi)發(fā)*的檢測(cè)技術(shù)及產(chǎn)品?？擅鎸?duì)大型檢驗(yàn)檢測(cè)機(jī)構(gòu)和企業(yè)自有實(shí)驗(yàn)室提供全系列產(chǎn)品和有效的。

詳細(xì)介紹

一、原理
本試劑盒采用間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法檢測(cè)水產(chǎn)和雞肉等組織樣本中的*，在微孔條上預(yù)包被上偶聯(lián)抗原，利用抗原與抗體的特異性免疫化學(xué)反應(yīng)的原理來(lái)進(jìn)行的，樣本中的*和微孔條上預(yù)包被偶聯(lián)抗原競(jìng)爭(zhēng)抗*的抗體，加入酶標(biāo)記物后，用TMB底物顯色，樣品中的*含量與樣品的吸光度值呈反比，與標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)比較即可得出*含量。

二、試劑盒技術(shù)指標(biāo)：
試劑盒靈敏度：          0.1ppb
樣本檢測(cè)下限：
組織(蝦、魚(yú))           0.1ppb
豬肉/肝雞肉/肝            2ppb
飼料                      20ppb
尿液                      0.6ppb
回收率：
飼料                      90±10%
組織                      85±10%
尿液                      80±10%
交叉反應(yīng)率：
*                  *
雙烯雌酚                  35%
己烷雌酚                  10%
己炔雌二醇                <0.1%
雌三醇                    <0.1%

三、試劑盒組成
1．酶標(biāo)板：96T/8孔
2．標(biāo)準(zhǔn)品液： 0ppb、0.1ppb、0.3ppb、0.9ppb、2.7ppb、8.1ppb(1.0mL/瓶)
3．酶標(biāo)記物            12mL
4．抗體工作液          7mL
5．底物緩沖液          7 mL
6．底物液              7 mL
7．終止液              7 mL
8．20倍濃縮洗滌液     50 mL     用去離子水稀釋到1000 mL
9．20倍濃縮復(fù)溶液     12mL     用去離子水稀釋到240 mL

四、樣本前處理步驟
樣本處理前須知：
1．實(shí)驗(yàn)中必須使用一次性吸頭，在吸取不同的試劑時(shí)要更換吸頭。
2．實(shí)驗(yàn)之前須檢查各種實(shí)驗(yàn)器具是否干凈，必要時(shí)可對(duì)實(shí)驗(yàn)器具進(jìn)行清潔，以避免污染干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
樣本前處理需配制：
配液1：6M H3PO4   100mL   濃H3PO4(含量85%) 加去離子水150mL混合均勻
配液2：1M NaOH    4g      NaOH     加去離子水100mL溶解
配液3：2M NaOH    8g        NaOH   加去離子水100mL溶解
配液4：乙腈-丙酮    80mL      乙腈    加入丙酮20mL混合均勻

樣本的處理：
(a)飼料樣本
1．稱(chēng)取2±0.05g搗粹后的飼料樣本，加入8mL乙腈，振搖10min，15℃，3000g以上，離心10min；
2．取2mL上清液，60℃氮?dú)?空氣吹干；
3．加入0.5mL氯仿，渦動(dòng)20s，加入2mL 1M NaOH，渦動(dòng)30s，3000g以上，離心5min；
4．取1mL上清液，加入100µL 6M H3PO4，渦動(dòng)5s；

不同樣本按如下方法稀釋?zhuān)?br />配合料：取50µL，加入950µL的復(fù)溶液，渦動(dòng)混勻，取50µL /孔用于檢測(cè)。
濃縮料/預(yù)混料：取25µL，加入975µL復(fù)溶液，渦動(dòng)混勻，取50µL /孔用于檢測(cè)。取50µL用于分析。
配合料稀釋倍數(shù)：100
濃縮料、預(yù)混料稀釋倍數(shù)：200
(b)組織(雞肉/肝、豬肉/肝、蝦、魚(yú))
1．稱(chēng)取2±0.05g勻漿后的樣本，加入6mL乙腈-丙酮，振搖10min，15℃，3000g以上，離心10min。
2．取3mL上清液，60℃氮?dú)?空氣吹干。
加入0.5mL氯仿，渦動(dòng)20s，加入2mL 2M NaOH，渦動(dòng)30s，3000g以上，離心5min。
3．取1mL上清液，加入200µL 6M H3PO4，渦動(dòng)5s。
4．加入3mL乙腈萃取，振蕩10min，室溫3000g以上，離心10min，取上層有機(jī)相， 60℃氮?dú)?空氣吹干。
用1mL復(fù)溶液溶解干燥的殘留物。

不同樣本按如下方法稀釋?zhuān)?br />蝦魚(yú)：直接取50µL水相用于檢測(cè)。稀釋倍數(shù)：2
豬肉/肝、雞肉/肝：取50µL水相加入450µL稀釋后的復(fù)溶液，渦動(dòng)均勻；取50µL用于檢測(cè)。
稀釋倍數(shù)：20
(c)尿液
1．取2mL尿液到離心管中，室溫3000g以上，離心10min，直至清亮；
2．移取1mL清亮尿液至離心管中，加入1mL　1M NaOH強(qiáng)烈振蕩5min；
3．加入100µL 6M H3PO4，渦動(dòng)30 s；
4．再加入8mL氯仿進(jìn)行萃取，振蕩10min。15℃，3000g以上，離心10min；
5．去掉上層的水相，取下層有機(jī)相4 mL，60℃氮?dú)?空氣吹干；
6．用3mL稀釋后的復(fù)溶液干燥的殘留物；
取50µL 用于分析。
樣本稀釋倍數(shù)：6

五、操作步驟
1．將試劑盒從冷藏環(huán)境中取出并將所需試劑從試劑盒取出，置室溫(20-25℃)平衡30min以上, 注意每種液體試劑使用前均須搖勻。
2．按需要取出微孔條及板架，將不用的微孔板重新密封，保存于2-8℃，不要冷凍。
3．加標(biāo)準(zhǔn)品/樣本50µL /孔，然后加入抗體工作液50µL /孔，再振蕩混勻，用封板膜蓋板，室溫反應(yīng)30min。
4．洗板4-5次，每次浸泡30秒，拍干。
5．加入酶標(biāo)記物100µL /孔，用封板膜蓋板，室溫反應(yīng)20min。
6．洗板4-5次，每次浸泡30秒，拍干。
7．顯色：每孔加入底物緩沖液50µL，再加底物液50µL，輕輕振蕩混勻，25℃環(huán)境避光顯色10min。
8．測(cè)定：每孔加入終止液50µL，輕輕振蕩勻，設(shè)定酶標(biāo)儀于450nm處(在20min內(nèi)讀完數(shù)據(jù))，測(cè)定吸光度值。

六、結(jié)果判定
以標(biāo)準(zhǔn)品百分吸光率為縱坐標(biāo)，以*標(biāo)準(zhǔn)品濃度(ng/mL)的半對(duì)數(shù)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)圖。將樣本的百分吸光率代入標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)中，從標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)上讀出樣本所對(duì)應(yīng)的濃度，乘以其對(duì)應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中*實(shí)際濃度。

七、注意事項(xiàng)
1. 終止液為2M ，避免接觸皮膚。
2. 不要使用已過(guò)有效日期的孔雀石綠檢測(cè)試劑盒；不同批次、不同試劑盒之間的試劑等內(nèi)容不可混用，以免降低靈敏度。
3. 0標(biāo)準(zhǔn)液的A450nm<0.6時(shí)，表示試劑可能變質(zhì)，請(qǐng)勿使用。
4. 顯色劑變藍(lán)，表明已變質(zhì)，請(qǐng)勿使用。

八、儲(chǔ)藏條件和保質(zhì)期
儲(chǔ)藏條件：試劑盒于2-8℃保存，不要冷凍。
保質(zhì) 期：該產(chǎn)品有效期為1年，生產(chǎn)日期見(jiàn)包裝盒。