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活化 Arf1 Pull-Down 和檢測(cè)試劑盒

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產(chǎn)品型號(hào)Thermo Scientific

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更新時(shí)間：2023-08-07 22:17:45瀏覽次數(shù)：119次

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產(chǎn)品分類 品牌分類

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活化 Arf1 Pull-Down 和檢測(cè)試劑盒

詳細(xì)介紹

Thermo Scientific Pierce 活化 Arf1 沉降和檢測(cè)試劑盒是一種全套試劑盒，能夠通過與 GGA3 蛋白結(jié)合結(jié)構(gòu)域的特異性蛋白相互作用選擇性地富集和檢測(cè) GTP 結(jié)合 Arf1 GTPase。

活化 Arf1 沉降和檢測(cè)試劑盒包含純化的 GST-GGA3 結(jié)合結(jié)構(gòu)域 (PBD)、瓊脂糖樹脂、陽性和陰性對(duì)照品（分別為 GTPγS 和 GDP）、裂解/結(jié)合/洗滌緩沖液、抗 Arf1 一抗、樣品緩沖液、離心柱和收集管。該試劑盒使用 MDCK 細(xì)胞的裂解物進(jìn)行驗(yàn)證，已知該細(xì)胞系具有穩(wěn)健的 Arf1 活性。

活化 Arf1 沉降和檢測(cè)試劑盒的特點(diǎn)：

?高靈敏度和精確度—優(yōu)化試劑、特異性抗 Arf1 抗體和 Western 印跡程序可確保精確控制和半定量結(jié)果
?經(jīng)驗(yàn)證—對(duì) Arf1 檢測(cè)進(jìn)行功能檢測(cè)，以確保質(zhì)量和性能
?兼容—對(duì)小鼠、大鼠和人來源的多種細(xì)胞類型有效

應(yīng)用：
? 追蹤細(xì)胞分化、遷移、分裂和細(xì)胞骨架重排期間的 Arf1 GTPase 活化
? 研究外殼蛋白組裝至出芽囊泡或反式高爾基體網(wǎng)絡(luò)和內(nèi)體期間 Arf1 的活化
? 監(jiān)測(cè)使用生長(zhǎng)因子刺激后的 Arf1 活性
? 監(jiān)測(cè)小分子抑制劑處理后的 Arf1 活性

使用經(jīng)用于活化內(nèi)源性 Arf1 的 GTPγS 處理的細(xì)胞裂解物相對(duì)于經(jīng)滅活小 GTPase 的 GDP 處理的裂解物，驗(yàn)證了活化 Arf1 沉降和檢測(cè)試劑盒的活化 Arf1 富集方法的功能和特異性。GTPγS 處理捕獲 GTP 結(jié)合活化形式的 Arf1，在存在內(nèi)源性 Arf1 時(shí)產(chǎn)生強(qiáng)烈信號(hào)。GDP 處理使 Arf1 進(jìn)入 GDP 結(jié)合狀態(tài)（非活化），無論 Arf1 蛋白水平如何均幾乎不產(chǎn)生信號(hào)。對(duì)試劑盒進(jìn)行了優(yōu)化，用于使用 HRP 結(jié)合型二抗（山羊抗兔 IgG，產(chǎn)品編號(hào) 31460）和 Thermo Scientific SuperSignal West Pico 化學(xué)發(fā)光底物（產(chǎn)品編號(hào) 34080）進(jìn)行 Western 印跡檢測(cè)。試劑盒所含成分均足夠進(jìn)行 30 次沉降實(shí)驗(yàn)。

Arf1 背景：
ADP 核糖基化因子蛋白 1-6 (Arf) 是 Ras 小 GTPase 家族的成員。雖然在結(jié)構(gòu)上相似，但 Arf1-6 的細(xì)胞作用不同于其他 Arf 家族成員；其內(nèi)源性作用不是 ADP 核糖基化，而是調(diào)節(jié)異源三聚體 G 蛋白。Arf 蛋白可分為三類：I 類 — Arf 1-3；II 類 — Arf 4,5；III 類 — Arf6。I 類和 II 類 Arf 與反式高爾基體網(wǎng)絡(luò) (TGN) 相關(guān)，參與將效應(yīng)蛋白募集至高爾基體膜并形成囊泡。與其他 GTPase 不同，Arf GTPase 在氨基末端通過豆蔻?；揎椧员悴迦肽ぶ?。III 類蛋白 Arf6 與質(zhì)膜相關(guān)，參與質(zhì)膜處的囊泡形成、囊泡再循環(huán)和肌動(dòng)蛋白細(xì)胞骨架的重構(gòu)。

盡管 Arf GTPase 在所有細(xì)胞中均有表達(dá)，但 Arf1 是極豐富、極活躍和進(jìn)行表征的。Arf1 將其效應(yīng)子（包括外被體和網(wǎng)格蛋白適配體復(fù)合物 (AP)）募集至高爾基體，發(fā)生囊泡形成和出芽。募集后，Arf1 維持膜上的外殼蛋白，直至形成囊泡。然后，Arf1 與其效應(yīng)子相互作用，使得 Arf1 從膜中釋放和囊泡出芽。高爾基體局部含 γ耳 Arf (GGA) 效應(yīng)子結(jié)合蛋白包含氨基端 VHS 結(jié)構(gòu)域、GGA 同源結(jié)構(gòu)域 (GGAH)、富含的連接區(qū)和羧基-末端 γ-耳銜接蛋白同源結(jié)構(gòu)域 (AGEH)。VHS 結(jié)構(gòu)域與細(xì)胞質(zhì)結(jié)構(gòu)域相互作用（進(jìn)行受體分選）、GGAH 與活化 Arf 結(jié)合、富含的區(qū)域與網(wǎng)格蛋白相互作用以及 AGEH 結(jié)構(gòu)域與細(xì)胞溶質(zhì)蛋白相互作用。通過突變研究，已證明 GGAH 結(jié)構(gòu)域足以結(jié)合 GTP 結(jié)合型 Arf，并且 Arf1 可結(jié)合所有三種 GGA 效應(yīng)蛋白。GGA 蛋白與 TGN 和質(zhì)膜的關(guān)聯(lián)受 Arf 調(diào)節(jié)。

更多產(chǎn)品數(shù)據(jù)
?通過特異性下游效應(yīng)子測(cè)定小 GTPase 的激活

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