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禽流感病毒RT-PCR檢測(cè)試劑盒

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商鋪產(chǎn)品:1563條

所在地區(qū):廣東廣州市

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產(chǎn)品簡(jiǎn)介

禽流感病毒RT-PCR 檢測(cè)試劑盒,采用反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR )技術(shù)檢測(cè)禽組織、分泌物和排泄物中所有亞型的AIV,適用于AIV的檢測(cè)、診斷和流行病學(xué)調(diào)查。

詳細(xì)介紹

 

禽流感病毒RT-PCR 檢測(cè)試劑盒,采用反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR )技術(shù)檢測(cè)禽組織、分泌物和排泄物中所有亞型的AIV,適用于AIV的檢測(cè)、診斷和流行病學(xué)調(diào)查。
【原理】
      利用吸附柱提取RNA作為模板,在反轉(zhuǎn)錄酶的作用下,以引物為起點(diǎn)合成與RNA 模板互補(bǔ)的cDNA鏈;然后在DNA 聚合酶的作用下,經(jīng)高溫變性、低溫退火和中溫延伸的多次循環(huán),使特異DNA 片段的拷貝數(shù)放大數(shù)百萬倍。將擴(kuò)增的DNA 片段進(jìn)行電泳、染色后,在紫外燈下,肉眼可見DNA 片段的擴(kuò)增帶。
【試劑盒組份】

1. 生理鹽水
20mL
8. 吸附柱和收集管
10
2. 裂解液
6mL
9. 0.2 mL 薄壁PCR
15個(gè)
3. 洗滌液A
7mL
10. RT-PCR 反應(yīng)液A
180μL
4. 洗滌液B
7mL
11. RT-PCR 反應(yīng)液B
50μL
5. 洗脫液
500μL
12. 50 TAE 電泳緩沖液
20mL
6. 陰性對(duì)照
300μL
13. 染色液
10μL
7. 陽(yáng)性對(duì)照
300μL
 
 

注:塑料袋內(nèi)試劑(陽(yáng)性對(duì)照、RT-PCR反應(yīng)液AB-20 凍存,裂解液2-8冷藏,其他室溫保存。
【操作方法】
一、樣品制備
1樣品采集:病死或撲殺的禽,取喉氣管、腦、胸肌、心肌和肺等組織;待檢活禽,用棉拭子取呼吸道分泌物或排泄物,置于50%生理鹽水中,28 保存。(要求送檢病料新鮮,嚴(yán)禁反復(fù)凍融。)
2樣品處理:
2.1 組織樣品的處理:稱取組織0.1g于研磨器中磨碎,再加1mL生理鹽水繼續(xù)磨至無塊狀物;然后將樣品轉(zhuǎn)至1.5 mL滅菌離心管中,8000 rpm離心2 min,取100 µL上清于1.5 mL 滅菌離心管中。
2.2 全血樣品的處理:待血凝后取100 µL血清于1.5 mL 滅菌離心管中。
2.3 陽(yáng)性對(duì)照的處理:取陽(yáng)性對(duì)照 100 µL1.5 mL 滅菌離心管中。
2.4 陰性對(duì)照的處理:取陰性對(duì)照100 µL1.5 mL 滅菌離心管中。
二、病毒RNA的提取
1. 取已處理的樣品、陰性對(duì)照和陽(yáng)性對(duì)照,分別加入450µL裂解液,充分顛倒混勻,室溫靜置3min 。
2., , , , , , 加入275µL無水乙醇,輕輕混勻。
3. 將混合液吸入吸附柱中(吸取液體時(shí)盡量不要吸到懸浮雜質(zhì),以免離心時(shí)堵塞吸附柱),10,000 rpm 離心1min,棄去收集管中液體,套回收集管。
4. 向吸附柱中加入500µL洗滌液A,10,000 rpm 離心1min,棄去收集管中液體,套回收集管。
5. 向吸附柱中加入500µL洗滌液B10,000 rpm 離心1min,棄去收集管中液體,套回收集管。
6. 空柱10,000 rpm 離心2 min。
7. 將吸附柱移入新的無RNA酶的1.5 mL離心管中,在膜*加入30µL洗脫液,室溫靜置2min,10,000 rpm 離心1min,獲得總RNA。
三、RT-PCR
1. 反應(yīng)體系:分別取14µL RT-PCR反應(yīng)液A用前混勻)、4µL RT-PCR反應(yīng)液B用前混勻)和2µL模板RNA,混勻。
2. 反應(yīng)程序:在PCR儀上運(yùn)行以下程序:42 45 min,94 3 min 94 30 s 、53 30 s 72 30 s,35個(gè)循環(huán);72 延伸10 min。
四、電泳
1. 制膠:用50倍稀釋的TAE電泳緩沖液配制1%瓊脂糖凝膠。
2. 電泳:待膠凝固后,取5µL PCR擴(kuò)增產(chǎn)物點(diǎn)樣于瓊脂糖凝膠孔中,以5V/cm的電壓于50 倍稀釋的TAE 電泳緩沖液中電泳。
3. 染色:取50 倍稀釋的TAE 電泳緩沖液30mL,加入10µL染色液,混勻后將膠浸泡30min,于紫外燈下觀察結(jié)果。
【結(jié)果判斷】
      陽(yáng)性對(duì)照出現(xiàn)400bp擴(kuò)增帶,陰性對(duì)照無帶出現(xiàn)(引物帶除外)時(shí),實(shí)驗(yàn)結(jié)果成立。被檢樣品出現(xiàn)400bp擴(kuò)增帶為禽流感病毒陽(yáng)性,否則為陰性。
【需用但未提供的材料】
      組織研磨器、眼科剪、*、一次性注射器、瓊脂糖、經(jīng)焦碳酸二乙酯(DEPC )處理的滅菌1.5mL 離心管和吸頭(10 µL、200 µL1000 µL)。
【注意事項(xiàng)】
1.本試劑盒有效期為6個(gè)月,不要使用超過有效期限的試劑,試劑盒之間的組分不要混用。
2.所有試劑應(yīng)在規(guī)定的溫度儲(chǔ)存,使用時(shí)拿到室溫下,使用后立即放回。
3.注意防止試劑盒組分受污染。使用前將塑料袋內(nèi)試劑瞬離15s,使液體全部沉于管底,放于冰盒中,吸取液體時(shí)移液器吸頭盡量在液體表面層吸取。
4.嚴(yán)格按試劑盒說明書操作可以獲得的結(jié)果。操作過程中移液、定時(shí)等全部過程必須精確。
5RNA提取過程中,應(yīng)戴口罩、勤換手套,盡量縮短操作時(shí)間。
6.所有接觸病料的物品均應(yīng)合理處理,以免污染實(shí)驗(yàn)室。
【公司名稱】廣州健侖生物科技有限公司
【】
【】
【電子郵件】 Service@jianlun.com
【騰訊 712628580 712628581 712628582
【公司】 www.jianlun.com
【公司地址】廣州市天河區(qū)車陂第十五工業(yè)園一幢4067

 說明書下載:http://www.jianlun.com/download/Products/qin/禽流感病毒RT-PCR 檢測(cè)試劑盒(通用型)-使用說明書.pdf

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